【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生命科学，具体涉及一种舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法及其应用。
技术介绍
1、舒-戴二氏综合征(shwachman-diamond syndrome,sds)是一种以胰腺外分泌功能不全、骨干骺端发育不良及不同程度的骨髓功能障碍伴血细胞减少为主要特征的常染色体隐性遗传病，通常婴幼儿期起病，可累及多个系统。约90％sds患者因sbds基因突变引起，该基因编码的sbds蛋白高度保守，主要参与核糖体合成、rna代谢及中性粒细胞趋化等重要生物学途径。据报道，该病在欧美的发病率约为0.5/105～1.5/105，国内具体发病率不详，截至2024年1月，国内报道不足百例。肝脏损伤是sbds基因缺陷患者常见的临床症状，可出现包括血清转氨酶和胆汁酸升高、肝肿大等一系列表现。但目前对于sbds基因缺陷引起肝损伤的机制研究很少。因此，如果能够提高对sds疾病的认识，可以减少临床医生对该疾病的漏诊误诊，减轻医疗经济负担。
2、现代医学研究离不开动物实验，实验动物已被广泛用于模拟疾病状态，从而更好的在体内研究疾病的发生、发展及治疗。只有选择合适的动物模型才能更好的模拟疾病状态，从而得出比较真实的实验数据。因此，建立一种模拟度高、稳定性持久、具有特定表型、高效的小鼠模型对研究疾病的发生发展具有指导价值。
3、目前已有多种研究sds疾病的动物模型。例如，2006年，zhang等人在《loss ofthemouse ortholog ofthe shwachman-diamond syndrome gene(sbds)
4、又如，finch等人在《uncoupling of gtp hydrolysis from eif6 release onthe ribosome causes shwachman-diamond syndrome》文章中通过基因打靶的方法在小鼠胚胎干细胞中构建了一个floxed sbds等位基因(sbdsfl),并将获得的嵌合体与野生型c57bl/6小鼠杂交，产生floxed杂合子sbdsfl/+。将sbdsfl/+小鼠与生殖细胞系删除器转基因品系杂交，产生sbds等位基因缺失的杂合小鼠sbds-/+。将sbdsfl/-tg：mx1–cre小鼠与sbdsfl/-tg：mx1-cre小鼠杂交得到将sbdsfl/fltg：mx1-cre小鼠。最后通过poly(i：c)处理sbdsfl/-tg：mx1-cre小鼠，靶向造血系统中的sbds。然而这种模型导致了严重的肝脏表型。
5、再如，tourlakis等人在《deficiency of sbds in the mouse pancreas leadsto features of shwachman-diamond syndrome,with loss ofzymogen granules》文章中使用flox的sbds等位基因产生胰腺特异性敲除小鼠，并与携带无义或与疾病相关的错义sbds等位基因的小鼠进行繁殖。最后通过受胰腺转录因子1a启动子调节的cre重组酶来特异性破坏胰腺中的sbds。这种模型表现出与人类sds胰腺紊乱相似的症状。除此之外，zambetti等人《deficiency of the ribosome biogenesis gene sbds in hematopoieticstem and progenitor cells causes neutropenia in mice by attenuating lineageprogression in myelocytes》文章中还报道一种shwachman-diamond综合征哺乳动物模型，其在表达髓系转录因子ccaat/增强子结合蛋白α(c/ebpα)的造血干细胞中产生了靶向下调sbds表达的小鼠。但这种模型导致严重的中性粒细胞减少症。
6、因此，有必要对sds模型展开更深入的研究。
技术实现思路
1、有鉴于此，为了解决现有sds模型所存在的造模周期长、造模途径复杂或引起其他系统严重病变等问题，本专利技术提供一种舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法及其应用。本专利技术基于sds病人“肝脏转氨酶升高”这一临床表现，采用sbds突变导致的肝损伤作为模拟对象，通过注射腺相关病毒aav8-sbds-rnai使小鼠肝脏sbds基因缺失，模拟舒-戴二氏综合征肝脏病变。该方法具有操作简单、模拟度高、稳定持久、高效、具有特定表型等特点。
2、本专利技术的目的之一在于提供一种舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法。
3、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
4、舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法，将腺相关病毒aav8-sbds-rnai注射到动物体内，对动物肝脏进行特异性sbds基因敲除，得到舒-戴二氏综合征肝脏病变动物模型。
5、作为优选，所述腺相关病毒aav8-sbds-rnai是将sbds的rnai干扰序列插入raav载体中得到；所述sbds的靶序列如seq id no:1所示。
6、作为优选，所述raav载体的血清型为aav8型。
7、作为优选，所述raav载体为gv698载体，其元件顺序为paav-apoe/haatp-egfp-mir155(mcs)-sv40 polya。
8、作为更优选，将sbds的rnai干扰序列插入raav载体，包装病毒后感染细胞，得到所述腺相关病毒aav8-sbds-rnai。
9、作为优选，所述腺相关病毒的注射方式包括尾静脉注射、腹腔注射、气管内注射、肌肉注射中的任一种或多种。
10、作为更优选，所述腺相关病毒的注射方式为尾静脉注射。
11、作为更优选，所述腺相关病毒的注射量为2×10^11v.g/200ul。
12、作为优选，所述动物包括小鼠、大鼠中的任一种或多种。
13、作为更优选，所述动物为小鼠。
14、作为最优选，所述动物为c57bl/6小鼠。
15、作为最优选，所述模拟方法包括：将腺相关病毒aav8-sbds-rnai用生理盐水稀释后，按2×10^11v.g/200ul的病毒液经尾静脉本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法，其特征在于，将腺相关病毒AAV8-Sbds-RNAi注射到动物体内，对动物肝脏进行特异性SBDS基因敲除，得到舒-戴二氏综合征肝脏病变动物模型。
2.根据权利要求1所述的模拟方法，其特征在于，所述腺相关病毒AAV8-Sbds-RNAi是将SBDS的RNAi干扰序列插入rAAV载体中得到；所述SBDS的靶序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述的模拟方法，其特征在于，所述rAAV载体的血清型为AAV8型。
4.根据权利要求2所述的模拟方法，其特征在于，所述rAAV载体为GV698载体，其元件顺序为pAAV-ApoE/hAATp-EGFP-MIR155(MCS)-SV40 PolyA。
5.根据权利要求1所述的模拟方法，其特征在于，所述腺相关病毒的注射方式包括尾静脉注射、腹腔注射、气管内注射、肌肉注射中的任一种或多种。
6.根据权利要求1所述的模拟方法，其特征在于，所述腺相关病毒的注射量为2×10^11v.g/200ul。
7.根据权利要求1所述的模拟方法
8.权利要求1～7任一项所述的模拟方法制得的舒-戴二氏综合征肝脏病变动物模型在用于舒-戴二氏综合征的发生和发展机理研究、新药研发和/或药物筛选中的应用。
9.权利要求1中所述的腺相关病毒AAV8-Sbds-RNAi在制备舒-戴综合征肝脏病变动物模型中的应用。
10.权利要求1中所述的腺相关病毒AAV8-Sbds-RNAi在制备用于抑制动物肝脏SBDS基因表达的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.舒-戴二氏综合征肝脏病变的模拟方法，其特征在于，将腺相关病毒aav8-sbds-rnai注射到动物体内，对动物肝脏进行特异性sbds基因敲除，得到舒-戴二氏综合征肝脏病变动物模型。
2.根据权利要求1所述的模拟方法，其特征在于，所述腺相关病毒aav8-sbds-rnai是将sbds的rnai干扰序列插入raav载体中得到；所述sbds的靶序列如seq id no:1所示。
3.根据权利要求2所述的模拟方法，其特征在于，所述raav载体的血清型为aav8型。
4.根据权利要求2所述的模拟方法，其特征在于，所述raav载体为gv698载体，其元件顺序为paav-apoe/haatp-egfp-mir155(mcs)-sv40 polya。
5.根据权利要求1所述的模拟方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：张祯祯，廖英蓝，周玉姣，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：
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