【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种缺失型α地中海贫血的标志物组合物、检测试剂及应用。
技术介绍
1、α地中海贫血(简称α地贫)是临床常见的常染色体隐形遗传病之一，其发病机制为α珠蛋白基因的缺失和突变导致其合成速率改变，引起红细胞内α珠蛋白链及β链珠蛋白比例失衡，导致红细胞寿命缩短，促使溶血性贫血的形成。该病全球分布广泛，在我国主要发生在长江以南的省份，又以广东、广西、海南等地高发，具有较高的患病率，危害极大。
2、α地贫在遗传学上具有高度的异质性，其主要分为缺失型和非缺失型两类。缺失型α地中海贫血是由于α珠蛋白基因的缺失导致α珠蛋白链合成减少或完全缺失的遗传性溶血性贫血。根据缺失的α基因数目可分为如下几类：①α地中海贫血静止型(α+)：两条染色体仅失活一个α珠蛋白基因，常见基因型包括αα/-α3.7(简称-α3.7)、αα/-α4.2(简称-α4.2)、αcsα/αα(简称αcs)、αqsα/αα(简称αqs)和αwsα/αα(简称αws)；②α地中海贫血中间型(α0)：失活两个α珠蛋白基因，常见基因型包括αα/--sea(简称--sea)、-α3.7/-α3.7和-α4.2/-α3.7；③血红蛋白病(hb h病)：3个α珠蛋白基因缺失，常见基因型包括-α3.7/--sea和-α4.2/--sea；④致死性巴氏水肿胎综合症(hb bart’s胎儿水肿综合征)：4个α珠蛋白基因全部缺失。不同α基因缺陷类型导致的肽链活性丧失程度不同，从而可导致不同的临床表征。因此，对缺失型α地中海贫血进行基因检测，将有助于缺失型α地中海贫
3、目前临床主要通过血红蛋白电泳或者高效液相色谱法进行血红蛋白组成分析，检测hb bart’s的含量，实现对α地贫的筛查。但是由于静止型α地贫(-α3.7、-α4.2、αcs、αqs、αws)和部分轻型α地贫无临床症状或仅有轻微小细胞低色素性贫血，难以通过hb bart’s的定量检测进行筛查。且hb bart’s极其不稳定，对样本采样及保存要求高，常因样本溶血、降解、保存不当以及年龄等因素，造成无法检测，使其临床应用受到限制。
4、还有部分现有技术采用pcr方法检测α地贫。例如，cn104212910b专利公开了一种单管扩增同时检测α和β地中海贫血基因试剂盒，其采用pcr方法检测3种缺失型α-地贫(--sea、-α3.7和-α4.2)、3种突变型α-地贫(cs、qs、ws)以及19种突变型β-地贫。又如，cn103602752b专利公开了一种检测稀有缺失型地中海贫血的引物组和试剂盒，其采用多重gap-pcr技术对11种稀有缺失基因型进行检测，具体包括6种α-地贫缺失基因型(--11.1、--fil、--thai、-α27.6、-α2.4、-α2.8)和5种β-地贫缺失基因型。这些现有方法可检测的缺失型α地中海贫血类型相对较少，多为已知突变位点的检测，不能够基于表型进行缺失型α地中海贫血普遍筛查。
5、因此，寻找各型缺失型α地中海贫血的诊断标志物，对于缺失型α地中海贫血的诊断、治疗具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物，该标志物组合物能够有效识别不同类型的缺失型α地中海贫血，为各型缺失型α地中海贫血的早期筛查和初步分型提供了支持。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为p1、p2、p3、p4、p5中任两种多肽片段的组合；所述p1的氨基酸序列如seq id no：1所示，所述p2的氨基酸序列如seq id no：2所示，所述p3的氨基酸序列如seq id no：3所示，所述p4的氨基酸序列如seq id no：4所示，所述p5的氨基酸序列如seq id no：5所示。
4、进一步，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种。
5、进一步，所述缺失型α地中海贫血包括α+、α0和/或hbh。
6、进一步，所述α+的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种；和/或所述α0的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种；和/或所述hbh的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种。
7、进一步，所述α+包括-α3.7、-α4.2、αcs、αqs和/或αws；所述α0包括--sea、-α3.7/-α3.7和/或-α4.2/-α3.7；所述hbh包括-α3.7/--sea和/或-α4.2/--sea。
8、进一步，所述-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2，更优选为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1；所述-α4.2的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p2、p4和p2；所述αcs的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2；所述αqs的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p2、p4和p1，更优选为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p2；所述αws的生物标志物组合物为p3和p1；所述--sea的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p3和p1、p3和p2；所述-α3.7/-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2；所述-α4.2/-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2；所述-α3.7/--sea的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p3和p1、p3和p2、p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2；所述-α4.2/--sea的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p3和p1、p3和p2、p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2。
9、本专利技术的目的之二在于提供一种缺失型α地中海贫血的检测试剂。
10、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
11、缺失型α地中海贫血的检测试剂，所述检测试剂包括试剂a、试剂b、试剂c、试剂d中的任一种或多种；所述试剂a为甲醇和水的混合液；所述试剂b为乙腈、甲醇和水的混合液；所述试剂c为胰酶溶液；所述试剂d为乙腈和水的混合液。
12、作为优选，所述试剂a中，甲醇和水的体积比为1:4。
13、作为优选，所述试剂b中，乙腈、甲醇和水的体积比为2:1:7。
14、作为优选，所述胰酶溶液的浓度为5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为P1、P2、P3、P4、P5中任两种多肽片段的组合；所述P1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述P2的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述P3的氨基酸序列如SEQID NO：3所示，所述P4的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述P5的氨基酸序列如SEQ IDNO：5所示。
2.根据权利要求1所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为P3和P1、P3和P2、P4和P1、P4和P2、P5和P1、P5和P2中的任一种或多种。
3.根据权利要求1所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血包括α+、α0和/或HbH。
4.根据权利要求3所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述α+的生物标志物组合物为P3和P1、P3和P2、P4和P1、P4和P2、P5和P1、P5和P2中的任一种或多种；和/或所述α0的生物标志物组合物为P3和P1、P3和P2、P4和P1、P4和P2、P5和P1、P5和
5.根据权利要求3所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述α+包括-α3.7、-α4.2、αCS、αQS和/或αWS；所述α0包括--SEA、-α3.7/-α3.7和/或-α4.2/-α3.7；所述HbH包括-α3.7/--SEA和/或-α4.2/--SEA。
6.根据权利要求5所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2；所述-α4.2的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P2、P4和P2；所述αCS的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2；所述αQS的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P1、P5和P2、P4和P2、P4和P1；所述αWS的生物标志物组合物为P3和P1；所述--SEA的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P3和P1、P3和P2；所述-α3.7/-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2；所述-α4.2/-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2；所述-α3.7/--SEA的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P3和P1、P3和P2、P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2；所述-α4.2/--SEA的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：P3和P1、P3和P2、P5和P1、P5和P2、P4和P1、P4和P2。
7.缺失型α地中海贫血的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括试剂A、试剂B、试剂C、试剂D中的任一种或多种；所述试剂A为甲醇和水的混合液；所述试剂B为乙腈、甲醇和水的混合液；所述试剂C为胰酶溶液；所述试剂D为乙腈和水的混合液。
8.分离并测定权利要求1所述的生物标志物组合物的峰面积比值的方法，其特征在于，采用液相色谱-串联质谱方法进行分离、定性、定量和比值测定，所述液相色谱-串联质谱方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述质谱检测是在电喷雾电离阳离子检测模式下，采用多反映监测的质谱模式进行检测。
10.权利要求1～6任一项所述的生物标志物组合物和/或权利要求7所述的检测试剂在制备用于筛查各类型缺失型α地中海贫血的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为p1、p2、p3、p4、p5中任两种多肽片段的组合；所述p1的氨基酸序列如seq id no：1所示，所述p2的氨基酸序列如seq id no：2所示，所述p3的氨基酸序列如seqid no：3所示，所述p4的氨基酸序列如seq id no：4所示，所述p5的氨基酸序列如seq idno：5所示。
2.根据权利要求1所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种。
3.根据权利要求1所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述缺失型α地中海贫血包括α+、α0和/或hbh。
4.根据权利要求3所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述α+的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种；和/或所述α0的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种；和/或所述hbh的生物标志物组合物为p3和p1、p3和p2、p4和p1、p4和p2、p5和p1、p5和p2中的任一种或多种。
5.根据权利要求3所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述α+包括-α3.7、-α4.2、αcs、αqs和/或αws；所述α0包括--sea、-α3.7/-α3.7和/或-α4.2/-α3.7；所述hbh包括-α3.7/--sea和/或-α4.2/--sea。
6.根据权利要求5所述的生物标志物组合物，其特征在于，所述-α3.7的生物标志物组合物为如下组合中的任一种或多种：p5和p1、p5和p2、p4和p1、p4和p2；所述-α4.2的生物标志物组合物为...
【专利技术属性】
技术研发人员：余朝文，黄文霞，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。