【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及嵌合检查点受体(ccr)融合蛋白、编码所述融合蛋白的核酸分子、包含所述核酸分子的载体、包含所述核酸分子和/或表达所述融合蛋白的宿主细胞、用于提供所述宿主细胞的方法、包含所述融合蛋白、核酸分子或宿主细胞的药物组合物、和所述产物用作药物和用于b细胞淋巴瘤的治疗。
技术介绍
1、car t细胞的概念和优势是本领域众所周知的，并且近年来已经成为药物研究和开发的焦点。car t细胞在患者中的成功临床应用的主要实例是tisagenlecleucel在us以及在eu用于b细胞急性淋巴细胞白血病的治疗的监管批准。然而，患者中的某些副作用和不同程度的治疗成功可能使第二代car t细胞诸如tisagenlecleucel在患者中的使用复杂化。
2、与tisagenlecleucel在患者中的使用相关的主要问题是恶性以及健康cd19+b淋巴细胞的普遍耗竭(depletion)，导致报道的b细胞发育不全以及随后的低丙种球蛋白血症(ali s等人,2020oncologist,25(2):e321-e327)。
3、此外，在用tisagenlecleucel治疗的患者中已经观察到实质性神经毒性，这可归因于cd19在周细胞(pericyte)上的表达，因此造成在靶脱肿瘤效应(on-target off-tumoreffect)。已报道cd19特异性car t细胞和cd19+周细胞之间的相互作用导致此类细胞中il-2和il-6的不期望释放的诱导，这然后可导致神经症状(parker kr等人,2020 cell,183(1
4、il-2和il-6两者都被认为是警报细胞因子(alarm cytokine)，其转而可以招募和激活其它免疫细胞诸如巨噬细胞，然后有助于激活之后的增加的il-6释放。通常，增加的il-6释放可导致细胞因子释放综合征(crs)，这可在患者中引发威胁生命的情况。
5、增加的il-2释放对car t细胞活性具有又另一负面影响。il-2对调节性t细胞的增殖至关重要，其转而可以减少t细胞活性(chinen t等人,2016nat immunol,17(11):1322-1333)。
6、可能由于上述原因，本专利技术人意识到先前用tisagenlecleucel car t细胞治疗的荷b细胞淋巴瘤(cd19+cd80+cd86+)动物在所有病例的约50％中发展肿瘤复发。使用tisagenlecleucel car t细胞的具有肿瘤复发的那些动物的再治疗没有导致治疗成功。
7、基于关于目前可用的car t细胞的使用的上述情况，本专利技术人由此着手克服现有技术的缺点，并且提供和实现有利的和改进的car t细胞疗法。
8、因此，本专利技术的一个目的在于提供具有增加的安全性和效率的car t细胞疗法，其避免除了恶性b淋巴细胞以外的细胞和细胞类型、诸如健康b淋巴细胞和cd19+周细胞的非特异性靶向。
9、本专利技术的进一步目的在于提供允许维持健康b淋巴细胞的群体并且避免在使用如现有技术中所述的car t细胞疗法的情况下可能出现的神经中毒症状的car t细胞疗法。
10、本专利技术的另一目的在于提供降低诸如il-2和il-6等警报细胞因子的释放以避免作为突出的副作用的细胞因子释放综合征的car t细胞疗法。
11、本专利技术的又一目的在于避免b细胞淋巴瘤患者中的肿瘤复发，并且为先前用常规car t细胞疗法治疗并经历肿瘤复发的患者提供有前景的治疗选择。
技术实现思路
1、上述目的通过如下文中详细说明的本专利技术的方面得以解决。
2、根据本专利技术的第一方面，提供一种融合蛋白，其包括包含对cd80和/或cd86具有特异性亲和力的多肽的细胞外结构域、跨膜结构域、和包含共刺激多肽的细胞内结构域。
3、在本专利技术的第一方面的优选实施方案中，对cd80和/或cd86具有特异性亲和力的多肽具有与人类ctla-4的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:1)为至少80％相同的氨基酸序列、或与人类cd28的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:2)为至少80％相同的氨基酸序列、或与本领域通常称为克隆hu3d1的抗cd86抗体的cd86结合结构域的氨基酸序列(seq id no:5)为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中对cd80和/或cd86具有特异性亲和力的多肽具有与人类ctla-4的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:1)为至少80％相同的氨基酸序列。
4、在本专利技术的第一方面的另一优选实施方案中，跨膜结构域适合于融合蛋白在哺乳动物细胞的细胞膜中的插入和锚定，优选地其中跨膜结构域包含以下的一者或更多者的跨膜区域：t细胞受体的α、β或ζ链，ctla-4，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8(例如，cd8α，cd8β)，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137，cd154，cd200，kirds2，0x40，cd2，cd27，lfa-1(cdlla，cd18)，icos(cd278)，4-1bb(cd137)，gitr，cd40，baffr，hvem(lightr)，slamf7，nkp80(klrf1)，cd160，cd19，il2rβ，il2rγ，il7r.α.，vla1，itga1，cd49a，itga4，ia4，cd49d，itga6，vla-6，cd49f，itgad，cdlld，itgae，cd103，itgal，cdlla，lfa-1，itgam，cdllb，itgax，cdllc，itgb1，cd29，itgb2，cd18，lfa-1，itgb7，tnfr2，dnam1(cd226)，sfamf4(cd244，2b4)，cd84，cd96(触觉(tactile))，ceacam1，crtam，ly9(cd229)，cd160(by55)，psgl1，cd100(sema4d)，slamf6(ntb-a，lyl08)，seam(slamf1，cd150，ipo-3)，blame(slamf8)，selplg(cd162)，ltbr，和pag/cbp，或与其为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中跨膜结构域包含人类ctla-4的跨膜区域(seq id no:1)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列。
5、在本专利技术的第一方面的一个优选实施方案中，融合蛋白的共刺激多肽包含以下的一者或更多者的细胞内结构域：人类4-1bb(cd137；seq id no:3)、cd3ζ(seq id no:25)、cd28、icos、ox-40、btla、cd27、cd30、gitr、myd88-cd40、kir2ds2和hvem，或与其为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中融合蛋白的共刺激多肽包含人类4-1bb的细胞内结构域(cd137；seq id no:3)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包含：
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述对CD80和/或CD86具有特异性亲和力的多肽具有与人类CTLA-4的细胞外结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)为至少80％相同的氨基酸序列、或与人类CD28的细胞外结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)为至少80％相同的氨基酸序列、或与本领域通常称为克隆hu3D1的抗CD86抗体的CD86结合结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中所述对CD80和/或CD86具有特异性亲和力的多肽具有与人类CTLA-4的细胞外结构域的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)为至少80％相同的氨基酸序列，和/或其中所述跨膜结构域适合于所述融合蛋白在哺乳动物细胞的细胞膜中的插入和锚定，优选地其中所述跨膜结构域包含以下的一者或更多者的跨膜区域：T细胞受体的α、β或ζ链，CTLA-4，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8(例如，CD8α，CD8β)，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137，C
3.根据权利要求1或2中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞外结构域包括包含人类CTLA-4的细胞外结构域(SEQ ID NO:1)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列的多肽，并且所述细胞内结构域包括包含人类4-1BB的细胞内结构域(CD137；SEQ ID NO:3)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列的共刺激肽。
4.一种核酸分子，其编码根据前述权利要求中任一项所述的融合蛋白。
5.一种载体，其包含根据权利要求4所述的核酸分子。
6.一种宿主细胞，其包含根据权利要求4所述的核酸分子或根据权利要求5所述的载体，优选地其中用根据权利要求4所述的核酸分子或根据权利要求5所述的载体转导所述宿主细胞，或者优选地其中将根据权利要求4所述的核酸分子或根据权利要求5所述的载体稳定地整合至所述宿主细胞的基因组中。
7.一种宿主细胞，其稳定地或瞬时地表达根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白。
8.根据权利要求6或7中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞稳定地或瞬时地表达包含对CD19具有特异性亲和力的细胞外结构域以及细胞内共刺激结构域的蛋白质，优选地其中所述对CD19具有特异性亲和力的细胞外结构域至少包含抗CD19抗体的抗...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，其包含：
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述对cd80和/或cd86具有特异性亲和力的多肽具有与人类ctla-4的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:1)为至少80％相同的氨基酸序列、或与人类cd28的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:2)为至少80％相同的氨基酸序列、或与本领域通常称为克隆hu3d1的抗cd86抗体的cd86结合结构域的氨基酸序列(seq id no:5)为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中所述对cd80和/或cd86具有特异性亲和力的多肽具有与人类ctla-4的细胞外结构域的氨基酸序列(seq id no:1)为至少80％相同的氨基酸序列，和/或其中所述跨膜结构域适合于所述融合蛋白在哺乳动物细胞的细胞膜中的插入和锚定，优选地其中所述跨膜结构域包含以下的一者或更多者的跨膜区域：t细胞受体的α、β或ζ链，ctla-4，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8(例如，cd8α，cd8β)，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137，cd154，cd200，kirds2，0x40，cd2，cd27，lfa-1(cdlla，cd18)，icos(cd278)，4-1bb(cd137)，gitr，cd40，baffr，hvem(lightr)，slamf7，nkp80(klrf1)，cd160，cd19，il2rβ，il2rγ，il7r.α.，vla1，itga1，cd49a，itga4，ia4，cd49d，itga6，vla-6，cd49f，itgad，cdlld，itgae，cd103，itgal，cdlla，lfa-1，itgam，cdllb，itgax，cdllc，itgb1，cd29，itgb2，cd18，lfa-1，itgb7，tnfr2，dnam1(cd226)，sfamf4(cd244，2b4)，cd84，cd96(触觉)，ceacam1，crtam，ly9(cd229)，cd160(by55)，psgl1，cd100(sema4d)，slamf6(ntb-a，lyl08)，seam(slamf1，cd150，ipo-3)，blame(slamf8)，selplg(cd162)，ltbr，和pag/cbp，或与其为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中所述跨膜结构域包含人类ctla-4的跨膜区域(seq id no:17)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列，和/或其中所述细胞内结构域包含以下的一者或更多者的细胞内结构域或共刺激多肽：人类4-1bb(cd137；seq id no:3)、cd3ζ(seq id no:25)、cd28、icos、ox-40、btla、cd27、cd30、gitr、myd88-cd40、kir2ds2和hvem，或与其为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中所述细胞内结构域包含人类4-1bb的细胞内结构域或共刺激多肽(cd137；seq id no:3)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列，或其中所述细胞内结构域包含cd3ζ的细胞内结构域或共刺激多肽(seq id no:25)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列，优选地其中所述细胞内结构域包含人类4-1bb的细胞内结构域或共刺激多肽(cd137；seq id no:3)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞外结构域包括包含人类ctla-4的细胞外结构域(seq id no:1)、或与其为至少80％相同的氨基酸序列的多肽，并且所述细胞内结构域包括包含人类4-1bb的细...
【专利技术属性】
技术研发人员：马库斯·赫梅莱夫斯基，
申请(专利权)人：科隆大学，
类型：发明
国别省市：
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