【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
1、本文公开了根据以下式的分离的多特异性抗体：p1-l1-a1-l-b(式i)，其中a1包含cd28结合结构域；b包含pd-l1结合结构域；l包含连接a1与b的接头；p1包含结合至a1的肽，并且l1包含连接a1与p1的联接部分并且是肿瘤特异性蛋白酶的底物，其中p1包含根据seq idno:24-53、128-148的任一者和表20的氨基酸序列的任一者的氨基酸序列或相对于seq idno:24-53、128-148的任一者和表20的氨基酸序列的任一者具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。在一些实施方案中，多特异性抗体是根据以下式：p1-l1-a1-l-b-l2-p2(式ia)，其中p2包含结合至b的肽，并且l2包含连接b与p2的联接部分并且是肿瘤特异性蛋白酶的底物。在一些实施方案中，p1包含根据seq id no:24-53、128-148的任一者和表20的氨基酸序列的氨基酸序列。在一些实施方案中，p1包含根据seq id no:42-53的任一者的氨基酸序列或相对于seq id no:42-53的任一者具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。在一些实施方案中，p1包含根据seq id no:42-53的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，p1包含根据表20的氨基酸序列的任一者的氨基酸序列或相对于表20的氨基酸序列的任一者具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。在一些实施方案中，p1包含根据表20的氨基酸序列的任一者的氨基酸序列。...
【技术保护点】
1.一种根据以下式的分离的多特异性抗体：P1-L1-A1-L-B(式I)，其中A1包含CD28结合结构域；B包含PD-L1结合结构域；L包含连接A1与B的接头；P1包含结合至A1的肽，并且L1包含连接A1与P1的联接部分并且是肿瘤特异性蛋白酶的底物，其中P1包含根据X1-X2-X3-C-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-C-X11-X12的氨基酸序列，其中X1选自M、I、L和V；X2选自D、H、N、A、F、S、T、Y和V；X3选自W、L和F；X4选自P、A和L；X5选自R、T、I、M、S、K、L、V、W、F、A、P和D；X6选自E、D、Y、H、S、F、A、N、T、I、P和V；X7选自L、M、R、S、Q和H；X8选自W和Q；X9选自H、N、D、A、S、Y、T、F、V、L和I；X10选自E、V、L、D、Y、R、Q、H、F、K、A、M和N；X11选自F、Y、L、W和V；并且X12选自N、A、F、S、Y、H、D、T和L。
2.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中X1选自M、I和L；X2选自D、H、N和A；X3是W；X4是P；X5选自R、T、I、M、S和K；X6
3.如权利要求2所述的分离的多特异性抗体，其中X1是M；X2选自D和H；X3是W；X4是P；X5选自R、T和I；X6选自E、D和Y；X7选自L、M和R；X8是W；X9选自H、N、D和V；X10选自E、V、L、D和H；X11是F；并且X12选自N、A和F。
4.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:32具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含根据SEQ ID NO:32的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含根据SEQ ID NO:138的氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:138具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。
7.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含根据SEQ ID NO:138的氨基酸序列。
8.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1削弱A1与CD28的结合。
9.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1通过离子相互作用、静电相互作用、疏水相互作用、Pi-堆积相互作用和H键相互作用或其组合结合至A1。
10.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1在抗原结合位点或其附近结合至A1。
11.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中当L1被所述肿瘤特异性蛋白酶切割时，P1与A1解结合，从而使A1暴露于CD28。
12.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1与CD28具有小于75％的序列同一性。
13.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含与CD28共享小于10％的序列同一性的从头生成氨基酸序列。
14.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1包含经修饰氨基酸或非天然氨基酸或经修饰非天然氨基酸，或其组合。
15.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1不包含白蛋白或白蛋白片段。
16.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中P1不包含白蛋白结合结构域。
17.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1是具有至少5个至不多于50个氨基酸的肽序列。
18.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1是具有至少10个至不多于30个氨基酸的肽序列。
19.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1是具有至少10个氨基酸的肽序列。
20.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1是具有至少18个氨基酸的肽序列。
21.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1是具有至少26个氨基酸的肽序列。
22.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1包含包括(G2S)n的式，其中n是1至3的整数(SEQ ID NO:228)。
23.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1包含包括(G2S)n的式，其中n是至少为1的整数。
24.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中L1包含选自以下的式：(G2S)n、(GS)n、(GSGGS)n(SEQ...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种根据以下式的分离的多特异性抗体：p1-l1-a1-l-b(式i)，其中a1包含cd28结合结构域；b包含pd-l1结合结构域；l包含连接a1与b的接头；p1包含结合至a1的肽，并且l1包含连接a1与p1的联接部分并且是肿瘤特异性蛋白酶的底物，其中p1包含根据x1-x2-x3-c-x4-x5-x6-x7-x8-x9-x10-c-x11-x12的氨基酸序列，其中x1选自m、i、l和v；x2选自d、h、n、a、f、s、t、y和v；x3选自w、l和f；x4选自p、a和l；x5选自r、t、i、m、s、k、l、v、w、f、a、p和d；x6选自e、d、y、h、s、f、a、n、t、i、p和v；x7选自l、m、r、s、q和h；x8选自w和q；x9选自h、n、d、a、s、y、t、f、v、l和i；x10选自e、v、l、d、y、r、q、h、f、k、a、m和n；x11选自f、y、l、w和v；并且x12选自n、a、f、s、y、h、d、t和l。
2.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中x1选自m、i和l；x2选自d、h、n和a；x3是w；x4是p；x5选自r、t、i、m、s和k；x6选自e、d、y、h、s和f；x7选自l、m和r；x8是w；x9选自h、n、d、a、s和v；x10选自e、v、l、d和h；x11选自f、y和l；并且x12选自n、a、f、s和y。
3.如权利要求2所述的分离的多特异性抗体，其中x1是m；x2选自d和h；x3是w；x4是p；x5选自r、t和i；x6选自e、d和y；x7选自l、m和r；x8是w；x9选自h、n、d和v；x10选自e、v、l、d和h；x11是f；并且x12选自n、a和f。
4.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含根据seq id no:32的氨基酸序列或相对于seq id no:32具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含根据seq id no:32的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含根据seq id no:138的氨基酸序列或相对于seq id no:138具有1、2或3个氨基酸突变、取代或缺失的氨基酸序列。
7.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含根据seq id no:138的氨基酸序列。
8.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1削弱a1与cd28的结合。
9.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1通过离子相互作用、静电相互作用、疏水相互作用、pi-堆积相互作用和h键相互作用或其组合结合至a1。
10.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1在抗原结合位点或其附近结合至a1。
11.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中当l1被所述肿瘤特异性蛋白酶切割时，p1与a1解结合，从而使a1暴露于cd28。
12.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1与cd28具有小于75％的序列同一性。
13.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含与cd28共享小于10％的序列同一性的从头生成氨基酸序列。
14.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1包含经修饰氨基酸或非天然氨基酸或经修饰非天然氨基酸，或其组合。
15.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1不包含白蛋白或白蛋白片段。
16.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中p1不包含白蛋白结合结构域。
17.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1是具有至少5个至不多于50个氨基酸的肽序列。
18.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1是具有至少10个至不多于30个氨基酸的肽序列。
19.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1是具有至少10个氨基酸的肽序列。
20.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1是具有至少18个氨基酸的肽序列。
21.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1是具有至少26个氨基酸的肽序列。
22.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1包含包括(g2s)n的式，其中n是1至3的整数(seq id no:228)。
23.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1包含包括(g2s)n的式，其中n是至少为1的整数。
24.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1包含选自以下的式：(g2s)n、(gs)n、(gsggs)n(seq id no:58)、(gggs)n(seq id no:59)、(ggggs)n(seq id no:60)和(gssggs)n(seq id no:61)，其中n是至少为1的整数。
25.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述肿瘤特异性蛋白酶选自金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶和天冬氨酸蛋白酶。
26.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1包含尿激酶可切割氨基酸序列、膜型丝氨酸蛋白酶可切割氨基酸序列或基质金属蛋白酶可切割氨基酸序列。
27.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1包含根据seq id no:18-19、62-88的序列。
28.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1结合至a1的n-末端。
29.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l1结合至a1的c-末端。
30.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述cd28结合结构域包含单链可变片段、单结构域抗体、fab或fab′。
31.如权利要求30所述的分离的多特异性抗体，其中所述cd28结合结构域包含所述单链可变片段。
32.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述pd-l1结合结构域包含单链可变片段、单结构域抗体、fab或fab′。
33.如权利要求32所述的分离的多特异性抗体，其中所述pd-l1结合结构域包含所述fab或所述fab'。
34.如权利要求32所述的分离的多特异性抗体，其中所述pd-l1结合结构域包含所述fab或所述fab'并且所述cd28结合结构域包含所述单链可变片段。
35.如权利要求32所述的分离的多特异性抗体，其中包含所述fab或所述fab'的所述pd-l1结合结构域包含fab重链多肽和fab轻链多肽，所述fab重链多肽包含fab重链可变结构域，所述fab轻链多肽包含fab轻链可变结构域。
36.如权利要求35所述的分离的多特异性抗体，其中包含所述单链可变片段的所述cd28结合结构域包含scfv重链可变结构域和scfv轻链可变结构域。
37.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的c-末端与b的n-末端。
38.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的n-末端与b的c-末端。
39.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的c-末端与所述fab重链多肽的n-末端。
40.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的n-末端与所述fab重链多肽的c-末端。
41.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的c-末端与所述fab轻链多肽的n-末端。
42.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接a1的n-末端与所述fab轻链多肽的c-末端。
43.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域。
44.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域。
45.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域。
46.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域。
47.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的n-末端。
48.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c-末端。
49.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域的n-末端。
50.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab轻链多肽与所述scfv重链可变结构域的c-末端。
51.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的n-末端。
52.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv轻链可变结构域的c-末端。
53.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域的n-末端。
54.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头连接所述fab重链多肽与所述scfv重链可变结构域的c-末端。
55.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头的长度为至少5个氨基酸。
56.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述接头包含(g2s)n、(gs)n、(gsggs)n(seq id no:58)、(gggs)n(seq id no:59)、(ggggs)n(seq id no:60)和(gssggs)n(seq id no:61)，其中n是至少为1的整数。
57.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中l包含包括(g2s)n的式，其中n是1至3的整数(seq id no:228)。
58.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中所述l包含seq id no:18(ggggsggggsggggs)或seq id no:19(ggggs)的氨基酸序列。
59.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述scfv重链可变结构域的所述hc-cdr1、所述hc-cdr2和所述hc-cdr3包含：hc-cdr1：seq id no:1；hc-cdr2：seq id no:2；hc-cdr3：seq id no:3，并且其中所述cdr包含所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3的至少一个中的0-2个氨基酸修饰。
60.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv轻链可变结构域包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述scfv轻链可变结构域的所述lc-cdr1、所述lc-cdr2和所述lc-cdr3包含：lc-cdr1：seq id no:4；lc-cdr2：seq id no:5(ka)；和lc-cdr3：seq id no:6，并且其中所述cdr包含所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3的至少一个中的0-2个氨基酸修饰。
61.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中a1包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中a1的所述lc-cdr1、所述lc-cdr2和所述lc-cdr3包含：lc-cdr1：seqid no:4；lc-cdr2：seq id no:5(ka)；和lc-cdr3：seq id no:6；其中a1包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中a1的所述hc-cdr1、所述hc-cdr2和所述hc-cdr3包含：hc-cdr1：seq id no:1；hc-cdr2：seq id no:2；hc-cdr3：seq id no:3。
62.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述fab重链可变结构域包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中所述fab重链可变结构域的所述hc-cdr1、所述hc-cdr2和所述hc-cdr3包含：hc-cdr1：seq id no:10；hc-cdr2：seq id no:11；hc-cdr3：seq id no:12；并且其中所述cdr包含所述hc-cdr1、hc-cdr2或hc-cdr3的至少一个中的0-2个氨基酸修饰。
63.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述fab轻链可变结构域包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中所述fab轻链可变结构域的所述lc-cdr1、所述lc-cdr2和所述lc-cdr3包含：lc-cdr1：seq id no:13；lc-cdr2：seq id no:14(da)；和lc-cdr3：seq id no:15；并且其中所述cdr包含所述lc-cdr1、lc-cdr2或lc-cdr3的至少一个中的0-2个氨基酸修饰。
64.如权利要求1所述的分离的多特异性抗体，其中b包含互补决定区(cdr)：hc-cdr1、hc-cdr2和hc-cdr3，其中b的所述hc-cdr1、所述hc-cdr2和所述hc-cdr3包含：hc-cdr1：seqid no:10；hc-cdr2：seq id no:11；hc-cdr3：seq id no:12；并且其中b包含互补决定区(cdr)：lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3，其中b的所述lc-cdr1、所述lc-cdr2和所述lc-cdr3包含：lc-cdr1：seq id no:13；lc-cdr2：seq id no:14(da)；和lc-cdr3：seq id no:15。
65.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含与根据seq id no:7的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
66.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含seqid no:7的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
67.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含seqid no:7的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
68.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含seqid no:7的至少110个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与seq id no:7的所述至少110个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。
69.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv重链可变结构域包含根据seq id no:7的氨基酸序列。
70.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv轻链可变结构域包含与根据seq id no:8的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
71.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv轻链可变结构域包含seqid no:8的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
72.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv轻链可变结构域包含seqid no:8的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
73.如权利要求36所述的分离的多特异性抗体，其中所述scfv轻链可变结构域包含seqid no:8的至少100个连续氨基酸残基的氨基酸序列并且与seq id no:8的所述至少100个连续氨基酸残基具有至少80％序列同一性。
74.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·坎贝尔，托马斯·R·迪莱蒙多，
申请(专利权)人：佳努克斯治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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