一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，公开了一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体及其应用。本发明专利技术通过对茶树菇来源的非特异性过氧化酶的氨基酸序列进行第192位、第243位、第244位、第257位、第272位、第317位的单点或上述任意多点组合突变，使得非特异性过氧化酶的酶活得到提高，尤其是第244位与第272位的组合突变（V244I/S272A），其酶活达到8.9U/mL，在应用于一步制备25‑羟基‑维生素D3中，相对于原始酶，转化率提升了14倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，尤其涉及一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体及其应用。

技术介绍

1、茶树菇（agrocybe aegerita）的非特异性过氧化酶（ aaeupo）是高度糖基化的硫代血红素酶，upo是以h2o2为电子受体，不需要任何辅因子，与p450酶相比具有独特的优势。aaeupo可催化脂肪族和芳香族化合物的羟基化、环氧化、脱烷基等反应。除此之外，aaeupo也成功应用于医疗行业，aaeupo催化胆钙化醇和麦角钙化醇生成25-单羟基维生素，该产物既是维生素，也是一种类固醇激素，它在促进钙的吸收利用、调节激素分泌和免疫功能等方面均发挥重要作用，是人类健康重要的化合物。

2、pada-i的血红素结合区由两个保守区域构成，在这些区域中，pcp超二级结构（pro35-cys36-pro37）与血红素口袋中的fe3+形成轴向连接，这种结构使得血红素能够稳定地存在于口袋中，并参与到催化反应中。另一方面，egd超二级结构（glu122-gly123-asp124）则参与绑定血红素残基附近的mg2本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体，其特征在于：由如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列通过以下位点的单点突变或多点组合突变得到：

2.如权利要求1所述的一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列为选自SEQ ID NO.2至SEQ ID NO.12中的任意一个序列。

3.如权利要求1所述非特异性过氧化酶突变体的编码基因。

4.携带权利要求2所述的编码基因的重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为质粒、噬菌体或病毒载体。

6.携带权利要求3所述的编码基因或...

【技术特征摘要】

1.一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体，其特征在于：由如seq id no.1所示的氨基酸序列通过以下位点的单点突变或多点组合突变得到：

2.如权利要求1所述的一种酶活性提升的非特异性过氧化酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列为选自seq id no.2至seq id no.12中的任意一个序列。

3.如权利要求1所述非特异性过氧化酶突变体的编码基因。

4.携带权利要求2所述的编码基因的重组表达载体。

5.如权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，柯霞，郑彤，王恺睿，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：