用于乌梢蛇及5种混伪品药材、水提物的多重PCR-CE鉴别的引物组合、方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重PCR‑CE鉴别的引物组合，包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对和第六引物对，其序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:12所示。本发明专利技术还公开基于该引物组合的试剂盒，以及该引物组合或试剂盒在鉴别乌梢蛇及其五种常见混伪品药材、水提物中的应用。实施本发明专利技术，可同时有效鉴别乌梢蛇、百花锦蛇、赤链蛇、黑眉锦蛇、王锦蛇和灰鼠蛇，鉴别效率高，鉴别准确性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材鉴定，尤其涉及一种用于乌梢蛇及5种混伪品药材、水提物的多重pcr-ce鉴别的引物组合、方法及其应用。

技术介绍

1、动物药蛇类在我国中医药与民间医药中具有悠久的历史，且在长期临床应用中起着重要作用。根据《the reptile database》的收录，全世界有蛇3425种，中国有241种，而用于中药的蛇涉及5科、70种，明朝李时珍在《本草纲目》中记载的药用蛇类已超过17种。乌梢蛇为游蛇科动物乌梢蛇zaocys dhumnades(cantor)的干燥体。乌梢蛇多在夏、秋二季捕捉，剖开腹部或先剥皮留头尾，除去内脏，盘成圆盘状，干燥。其性平，味甘，具有祛风活络镇痛，除湿攻毒之功效，临床用于风湿顽痹、麻木拘挛、中风、口眼歪斜、半身不遂、抽搐、破伤风症、麻风、瘰疬、恶疮等。

2、乌梢蛇在《国家重点保护野生药材物种名录》中，被列为国家二级保护野生药材物种，也就说明乌梢蛇是分布区域缩小、资源处于衰竭状态的重要野生药材物种。2020年9月，国家林草局发布了《关于规范禁食野生动物分类管理范围的通知》，禁止以食用为目的的乌梢蛇养殖活动，仅允本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重PCR-CE鉴别的引物组合，其特征在于，包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对和第六引物对；

2.如权利要求1所述的引物组合的应用，其特征在于，包括下述的至少一种：

3.一种鉴别乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的试剂盒，包括如权利要求1所述的引物组合。

4.一种乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重PCR-CE鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.如权利要求4所述的乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重PCR-CE鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中多重PCR扩增程序包括以下步骤：...

【技术特征摘要】

1.一种用于乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重pcr-ce鉴别的引物组合，其特征在于，包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第四引物对、第五引物对和第六引物对；

2.如权利要求1所述的引物组合的应用，其特征在于，包括下述的至少一种：

3.一种鉴别乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的试剂盒，包括如权利要求1所述的引物组合。

4.一种乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重pcr-ce鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.如权利要求4所述的乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重pcr-ce鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中多重pcr扩增程序包括以下步骤：在92℃～96℃预变性4min～8min；在92℃～95℃变性20s～40s，在60℃～70℃退火30s～50s，循环20次～30次；在70℃～75℃延伸3min～6min。

6.如权利要求5所述的乌梢蛇及其混伪品药材、水提物的多重pcr-ce鉴别方法，其特征在于，步骤(2)中多重pcr扩增程序包括以下步骤：在95℃预变性5min；在95℃变性30s，在65℃退火45s...

【专利技术属性】
技术研发人员：冼乐尧，魏梅，陈向东，罗宇琴，宋叶，李国卫，孙冬梅，谭斯尹，刘闪闪，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：