耐高温的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体及在制备D-阿洛酮糖中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种耐高温的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶突变体及在制备D‑阿洛酮糖中的应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第17位、118位、121位、165位、197位、249位进行单突变或多突变获得的。本发明专利技术筛选得到的突变体能够耐受45～70℃高温，提高了突变酶的Tm值，延长了酶的半衰期，提高了酶对底物D‑阿洛酮糖的亲和力和转化效率，扩展了相对稀少的酶库，进而降低生产成本，进一步提高了D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】

(一)本专利技术涉及一种耐高温的d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体及在制备d-阿洛酮糖中的应用。

技术介绍

0、(二)
技术介绍

1、阿洛酮糖作为一种功能性的稀有糖，具有蔗糖70％的甜度，但其所具有的热量仅为蔗糖的0.31％，被认为是蔗糖和果葡糖浆理想的替代品。同时，2011年，阿洛酮糖已被美国食品和药物管理局(fda)作为一种安全的食品添加剂，并进一步于2019年被排除在“添加糖”、“总糖”标签之外。阿洛酮糖在预防肥胖，动脉粥样硬化治疗，抗高脂血症，抗炎，抗氧化，抗高血糖以及神经保护等方面具有特异性生理机制。此外，d-阿洛酮糖还可以在食物加工和储存过程中改善食物凝胶行为，增加风味，减少氧化反应。因此被广泛的应用于饮料、健康食物等领域，具有广泛的前景。

2、阿洛酮糖由于其稀有性，因此很难通过自然界大量获得。而化学合成具有不理想的副反应、纯化困难以及污染严重等问题，目前在工业应用上尚未取得突破；相比之下，生物途径具有高特异性以及环境友好等优点，根据izumoring策略，d-阿洛酮糖可由d-阿洛酮糖-3-差相异构酶催化d-果糖异构化而得本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种D-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第17位、118位、121位、165位、197位、249位进行单突变或多突变获得的。

2.如权利要求1所述的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述D-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列突变为下列之一：(1)第17位天冬酰胺突变为精氨酸；(2)第118位甘氨酸突变为赖氨酸；(3)第121位组氨酸突变为天冬氨酸；(4)165位苏氨酸突变为半胱氨酸；(5)197位异亮氨酸突变为苯丙氨酸；(6)249位苯丙氨酸突变为酪氨酸；(7)...

【技术特征摘要】

1.一种d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述突变体是将seq id no.2所示氨基酸序列第17位、118位、121位、165位、197位、249位进行单突变或多突变获得的。

2.如权利要求1所述的d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体，其特征在于，所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体是将seq id no.2所示氨基酸序列突变为下列之一：(1)第17位天冬酰胺突变为精氨酸；(2)第118位甘氨酸突变为赖氨酸；(3)第121位组氨酸突变为天冬氨酸；(4)165位苏氨酸突变为半胱氨酸；(5)197位异亮氨酸突变为苯丙氨酸；(6)249位苯丙氨酸突变为酪氨酸；(7)第121位组氨酸突变为天冬氨酸、第249位苯丙氨酸突变为酪氨酸，氨基酸序列如seq id no.4所示，核苷酸序列如seq id no.3所示。

3.一种含权利要求1所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体编码基因的重组基因工程菌。

4.一种权利要求1所述d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体在微生物催化d-果糖异构化制备d-阿洛酮糖中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用为：以含d-阿洛酮糖-3-差向异构酶突变体基因的重组大肠杆菌经发酵诱导培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎提取的纯酶液为酶源，以d-果糖为底物，以钴离子为助催剂，以ph6.5的缓冲液为反应介质构成反应体系，在50～80℃、1000r/min条件下反应，反应完全后，获得d-果糖和d-阿洛酮糖混合物。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述反应体系中，湿菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：金利群，郑琳，周晓静，柳志强，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：