从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用，所述方法为：取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。采用本发明专利技术方法提纯得到的车前醚苷不仅纯度高，而且药理活性强，可在药品检测中作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品使用，也可作为制剂原料药应用。本发明专利技术方法还具有成本低，适于规模化生产的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从中药结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用，属于中药

技术介绍
结石草Incarvillea argute (Royle) Royle又名毛子草，为紫威科角蒿属 Incarvillea L植物，别名炮仗花、马桶花、炮仗筒、金鸡豆、两头毛、麻叶子、羊胡子草、羊 奶子、燕山红、岩喇叭花；多年生草本，高达1.5m。根茎木质，粗壮，生于干热河谷、山坡灌 丛中。结石草的干燥或新鲜全草供药用，药性味苦、微辛、性平(国家中医药管理局编委 会，中华本草，上海科技出版社，1997， (7) :425)。彝族民间称结石草为"瓦布友"，变 称"肝炎草"，主要用于治疗肝炎、腹泻、牙痛、菌痢、痛肿、骨折血肿、风湿劳伤等症(李耕 冬，彝药"瓦布友"的研究，中草药，1986， 17 (6) :32-33)，临床也作为治疗肝炎和菌痢的药 物。有学者报道，结石草中主要化学成分有三十一烷、熊果酸、氯化钾、马桶花酮，毛子草碱 甲(argutine A)、毛子草碱乙(argutine B) 、boschniakinic acid等(吉腾飞，冯孝章，毛 子草化学成分研究，中草药，2002，33(11) :967-969)。现代药理实验表明马桶花酮具有抑 菌和镇静作用，还具有降低血清转氨酶作用。毛子草氯仿提取物对醋酸、二甲苯和组织胺 所致的小鼠腹腔和皮肤毛细血管通透性增高有明显的抑制作用；对巴豆油所致的小鼠耳部 炎症及蛋清所致小鼠足肿胀也有明显的抑制作用；对伤寒、副伤寒甲乙三联菌苗致热家兔 的体温升高有降低作用，可能是毛子草抗炎和解热作用的有效部分(黄良月等，中药通报， 1987,12(2) :54)。毛子草水提物对醋酸诱发的小鼠腹痛和热板引起的小鼠足痛均有抑制作 用(刘洋等，中医药信息，1999， 14(2))。单萜生物碱具有抗感受伤害活性。 在贵州，结石草苗语为Jab vib diangl(佳唉菪)，为苗族常用草药，具有消炎镇 痛、溶石和排石的功效，用于治疗胆囊炎、胆结石、肾结石、肾盂积水、膀胱结石等病(包骏， 冉懋雄，贵州苗药研究与开发，贵州科技出版社，2002 342)。本专利技术人在对其进行系统的化 学成分研究时发现，贵州产的结石草(毛子草)的主要化学成分为车前醚苷、5-羟基-4'， 7-二甲氧基黄酮、齐墩果酸等17个化合物，并发现了其中的车前醚苷具有一定的神经营养 活性，与文献吉腾飞等人报道的成分相差很大(如前所述)。 结石草为《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版收载药材，其中的药材质 量标准较简单，无定性、定量检测方法，目前尚无质量检测用标准物质。为了确保临床用药 的安全、有效和质量稳定可控，本专利技术人采用现代植物化学分离纯化技术对结石草的化学 成分进行了研究，并结合药效学实验，首次从结石草中分离得到了含量相对较高的有效成 分，并对其化学结构进行鉴定，确定了标准物质的制备工艺。 经活性研究发现，该物质具有好的体外溶石效果和体内抗炎镇痛活性，优于阳性 对照药物胆乐。车前醚苷可以作为药材或提取物的化学标准品、对照品使用，作为针对胆结 石、胆囊炎等症的制剂原料药应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用。本专利技术所提供的工艺方法解决了结石草中车前醚苷的提取纯化问题，所得产品纯度高，活性强，具有明显的抗炎镇痛活性和体外溶石效果，既可作为药品检测中的化学标准品或对照品使用，又可作为制剂原料药应用。 本专利技术是这样实现的从结石草中提取纯化车前醚苷的方法为取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓縮成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。 具体地说，可将结石草按常规水煎煮提取，过滤，滤液减压浓縮成浸膏，上大孔树脂，先用水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。 也可将结石草药材用30% 95%的乙醇按常规回流、浸渍方法提取，减压回收乙醇，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。 更具体的提取纯化车前醚苷的方法为将结石草药材粉碎，加水煎煮2 4次，每次0. 5 2小时，加水量为药材重量的6 20倍，滤过，合并滤液，滤液减压浓縮至30 8(TC相对密度为1.05 1.25的浸膏，上大孔树脂柱，树脂用量生药量=1 3 : l，先用1 3倍柱体积水洗，继用2 6倍柱体积30 95%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，洗脱剂采用氯仿甲醇水系统(5 10 : o. 5 1.5 : o. 05 o. 2)，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯pin 0 或者将结石草药材用30% 95%的乙醇回流提取2 4次，每次0. 5 2小时，加醇量为药材重量的6 20倍，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，所得浸膏用适量水稀释，上大孔树脂柱，树脂用量生药量=1 3 : l，先用1 3倍柱体积水洗，继用2 6倍柱体积20 95%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，洗脱剂采用氯仿甲醇水系统(5 io : o. 5 i. 5 : o. 05 o. 2)，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。 以上所述的大孔树脂型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400或HPD-600。 所述的硅胶为200 300目，上柱硅胶为浸膏重量的20 150倍。 所述的干燥方法为微波真空干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。 如上所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法提纯得到的车前醚苷。 本专利技术所述的车前醚苷可用于药品检测中作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品。 本专利技术所述的车前醚苷也可用于制备抗炎镇痛的药物；具体地说，可用于制备预防或治疗胆结石、胆囊炎的药物。如取车前醚苷，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型；或者将车前醚苷与其它原料药复配，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型。 为了确证本专利技术所得产品为车前醚苷，专利技术人对提取纯化后的物质进行了结构鉴定和纯度检测 1.结构鉴定 化合物无色粉末(易吸潮)，易溶于甲醇。 ^NMR(400MHz， CD3OD) S卯m:9.24(lH， s， CHO) ， 7. 41 (1H， s， C = CH)，5.85(1H，br. s) ， 4. 60 (1H， d， J = 7. 6Hz) ， 3. 90 (1H， d， J = 12. OHz) ， 3. 67 (1H， m) ， 3. 10—3. 40 (m， 4H)，2. 20-2. 50 (2H， m) ， 2. 28 (1H， m) ， 1. 80—2. 0 (2H， m) ， 1. 10 (1H， m) ， 0. 93 (3H， d = 6.本文档来自技高网...

【技术保护点】
从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨小生，马琳，夏勇兵，梁冰，郝小江，
申请(专利权)人：贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，
类型：发明
国别省市：52[]