本发明专利技术公开了金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用及产品，所述的金钗石斛生物总碱是从金钗石斛中提取的亲脂性总生物碱类成分。与现有技术相比，本发明专利技术针对脑卒中的发病机制，通过研究金钗石斛生物总碱对原代皮层神经元缺氧缺糖损伤模型的保护作用及对大鼠急性脑缺血模型的保护作用，并分析其机制，进一步明确了其治疗脑缺血的药理作用和机制，为金钗石斛药材的开发应用提供了药理学依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用及产品，属于中 药
技术介绍
脑血管疾病是神经系统的常见病、多发病，严重危害着人类健康。脑卒中是脑血管疾病 中的严重类型，其平均年发病率男性为124/10万一388/10万，女性为61/10万一312/10万， 具有极高的致残率和致死率。近年来我国脑卒中的死亡率下降，但发病率有上升趋势，并日 趋年轻化，有近25%发生于65岁以前，尤其是40岁以下的脑梗死患者，发病率较5年前提高6 倍。其中缺血性卒中的发生率是出血性卒中的3-4倍，占全部卒中的70%—80%。因此，对 脑卒中、尤其是缺血性卒中的治疗有待进一步研究和提高。脑卒中的病理生理机制比较复杂，有人提出损伤级联学说，包括兴奋性毒性，梗死周围 去极化，炎症和程序性死亡，且各个环节交互影响，形成复杂的网络联系。近年研究表明 caspase-3与缺血性卒中的发生发展密切相关，caspase-3参与了脑缺血后的神经元损伤过程 ，尤其是迟发性神经元死亡过程。脑缺血后，神经元caspase-3mRNA及蛋白表达明显增加。缺血性卒中目前的治疗药物有谷氨酸受体拮抗剂、钙离子通道阻滞剂、抗氧化剂、抗 炎剂、神经营养因子以及干细胞移植等，但都存在着各自的缺陷和不足。我国在用中草药防治缺血性脑血管疾病方面已有丰富的临床实践经验，中草药因含有多 种活性成分，具有多靶点的作用特点，在临床防治脑血管疾病中具有独特的优势。石斛(Dendrobium)是我国传统医学中的名贵中药材，包括马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石 斛、金钗石斛和D. officinale Kimkura et Mingo等。石斛的主要化学成分为多糖、生物碱 、氨基酸、酚类、挥发油等。现有研究表明，石斛属植物具有以下的药理作用减慢心率，拮抗肾上腺素、苯肾上腺素和5羟色胺对肠系膜血管的收縮；降低血黏度，拮抗花生四烯酸和胶原蛋白致兔血小板凝集；抗自由基损伤作用；拟似单胺氧化酶抑制剂，可调节单胺类递 质。金钗石斛生物总碱是金钗石斛的主要活性成分之一，具有抗肿瘤活性及免疫调节活性。 但前述金钗石斛属植物及金钗石斛生物总碱的药理作用及其机制尚不明确，有待进一步研究 和探索。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用及产品。本专利技术针对脑卒中的发病机制，通过研究金钗石斛生物总碱对大鼠急性脑缺血模型的保护作用，并分析其机制，进一步明确了其治疗缺血性脑损伤的药理作用机制，为金钗石斛药材的开发应用提供了药理学依据。本专利技术是这样构成的金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用。 所述的金钗石斛生物总碱是从金钗石斛中提取的亲脂性总生物碱类成分。 前述金钗石斛生物总碱的制备方法为取金钗石斛药材，粉碎成粗粉，加入乙醇提取3次，回收乙醇至无醇味，用酸溶液调PH至3 4，滤过，滤液用碱溶液调PH至IO，再用适量氯仿萃取5 8次，收集氯仿层，回收氯仿，干燥，即得。优选的制备方法为取金钗石斛药材，粉碎成粗粉，加入95%的乙醇回流提取3次，回收乙醇至无醇味，用盐酸调PH至3 4，滤过，滤液用10。/。氨水调PH至10，再用适量氯仿萃取5 8次，收集氯仿层，回收氯仿，干燥，即得。前述金钗石斛生物总碱中亲脂性总生物碱的含量》60%。一种治疗缺血性脑损伤的药物制剂，是以金钗石斛生物总碱为原料药，加入适量辅料制 成的口服制剂或注射剂。所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸剂、糖浆剂、舌下含片或注射剂。金钗石斛具有生津益胃、清热养阴的作用，本申请人通过对其化学成分、药理作用、作 用机制等方面进行深入细致的研究，发现金钗石斛药材中所含的生物碱成分能明显减轻缺氧 缺糖/复氧复糖所致原代培养神经元的损伤，有效减轻大鼠急性脑缺血所致神经功能损伤。 试验研究的主要过程及结果如下一.实验材料1. 实验动物SD大鼠，雄性体重为280-350g， SD大鼠乳鼠80只(l-3天)，清洁级动物，购自重庆市 中药研究院动物室，合格证号SCXK (渝)20020004。饲养环境的室温控制在20-25摄氏度 ，室内安静，每日光照12小时，动物自由进食水。2. 主要试剂及药品金钗石斛生物总碱由遵义医学院药化教研室提取，临用时以无水乙醇溶解，过滤除菌， 用生理盐水稀释至所需浓度；尼莫地平为上海华联制药有限公司生产，批号20060124;水 合氯醛为中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号F20050915; TTC为北京生化制药厂生产，批号20050302; DMEM/F12培养基:Sigma公司产品;胎牛血清(FBS):杭州四季青生 物公司；胰蛋白酶Gibco公司产品；HEPES: sigma公司产品；乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH) 、 MDA、 S0D、 NO检测试剂盒均为南京建成生物有限公司产品； TritonX-100:上海生工生物工程公司；牛血清白蛋白(BSA):华美生物工程公司； Fura-2/AM、 Rhodaminel23: Sigma公司产品。 3.主要仪器C02孵箱美国SL SHELNB公司；TMS-1015倒置显微镜日本0LYMPUS公司；TDGC2J-0. 5 超净工作台上海先锋电器厂；RF-5000荧光分光度仪日本岛津公司；荧光实时定量-PCR :美国百乐公司。二.方法与结果1.金钗石斛生物总碱对原代皮层神经元缺氧缺糖损伤模型的保护作用 1.1原代神经元培养出生3天内乳鼠，75%的酒精浸泡消毒，无菌条件下断头取脑。在 预冷的D-Hank's液中解剖分离大脑皮层。剔除脑膜和血管，D-Hank's液洗2-3次，剪成l mm3 左右的小块。加入O. 125。/。胰蛋白酶37。C消化20min。取出吹打，并用含20%胎牛血清的 DMEM/F12培养基终止反应。200目筛网过滤，1000r min—工离心8min。弃上清液，用含血清 培养基吹打成单细胞悬液，调节细胞悬液浓度为l X 109cells L—、 0. 4%台盼蓝镜检存活率 >95%，接种于经0.01%多聚赖氨酸浸泡过夜的孔板或培养瓶中，37。C恒温C02孵箱内(5%C02 ，湿度85-98%)培养。接种第3天全量换液，第5 — 6天加入含阿糖胞苷终浓度为5 y g/ml培 养基作用24 h，抑制胶质细胞的增殖。观察瓶内培养基颜色变化，2-3天换液一次。细胞培 养至第10天，经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学法鉴定，神经元占全部细胞的 95%以上，仅少数细胞是星型细胞和其他胶质细胞。1.2实验分组实验随机分为七组空白组，模型组，溶媒组，金钗石斛生物总碱低、 中、高组(终浓度分别为0.025mg L—、 0.25mg'L—工和2. 5mg'L—4和阳性对照组(尼莫地 平0. 42mg L—工)。1.3细胞缺氧缺糖损伤模型的建立以缺氧室(自制密闭保鲜盒，注入流速为lL-h 95%&和5%(]02的混合气体)来诱导细胞损伤。取培养9d的神经细胞，去除原培养液后，空白 组加入含糖Earle' s液置于37'C 5%(]02孵箱中继续培养。模型组加入无糖Earle' s液置于缺氧 室中孵育。分别处理不同时本文档来自技高网...
【技术保护点】
金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.金钗石斛生物总碱在制备治疗缺血性脑损伤的药物中的应用。2.按照权利要求l所述金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于所述 的金钗石斛生物总碱是从金钗石斛中提取的亲脂性总生物碱类成分。3.按照权利要求1或2所述金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于 所述金钗石斛生物总碱的制备方法为取金钗石斛药材，粉碎成粗粉，加入乙醇提取3次， 回收乙醇至无醇味，用酸溶液调PH至3 4，滤过，滤液用碱溶液调PH至IO，再用适量氯仿萃 取5 8次，收集氯仿层，回收氯仿，干燥，即得。4.按照权利要求3所述金钗石斛生物总碱的应用，其特征在于所述 金钗石斛生物总碱的制备方法为取金钗石斛...
【专利技术属性】
技术研发人员：石京山，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：52[中国|贵州]
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