【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在核酸测序中使用的方法和试剂盒，具体地用于在并行测序(以及具体地串联插入物文库的并行测序)中使用的方法。
技术介绍
1、普遍期望，双链dna分子的互补序列应承载相同的信息，并且因此，对分子的一条链进行测序应当足以确定序列。然而，在实践中，此观念并不准确。其中互补链之间的信息的对称性可能破坏的最常见情况是由于dna损伤造成的。dna的不同碱基对不同形式的损伤具有不同的易感性。例如，g对氧化损伤非常敏感，从而导致氧代-g的形成，该氧代-g的形成是文库制备相关的测序误差的主要原因之一，因为dna聚合酶通常会不忠实地将氧代-g与a配对，从而导致高质量的c>a测序误差。其中链之间的信息的对称性可能破坏的另一种情况是在甲基-c(mc)测序期间发生的。标准方案将c或mc修改成如u等替代性碱基，由此改变仅一条链中的序列信息。
2、已经提出各种策略来实现对双链dna分子的两条链的测序，这通常被称为双链体测序。
3、双链体测序的原始方法使用生物信息学方法或高深度测序数据来鉴定对应于原始模板dna分子的链中的每...
【技术保护点】
1.一种制备至少一个多核苷酸文库链模板的方法，其中所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一衔接子包括碱基配对的茎和环，其中所述第一限制性位点位于所述碱基配对的茎中。
3.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一衔接子包括碱基配对的茎和环，其中所述第一限制性位点位于所述环中。
4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一限制性位点是切刻核酸内切酶或限制性核酸内切酶的限制性位点。
5.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第二衔接子包括至少一个可切割位点和/或可切割位点的补体。
6.根...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制备至少一个多核苷酸文库链模板的方法，其中所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一衔接子包括碱基配对的茎和环，其中所述第一限制性位点位于所述碱基配对的茎中。
3.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一衔接子包括碱基配对的茎和环，其中所述第一限制性位点位于所述环中。
4.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一限制性位点是切刻核酸内切酶或限制性核酸内切酶的限制性位点。
5.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第二衔接子包括至少一个可切割位点和/或可切割位点的补体。
6.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第二衔接子包括碱基配对的茎和叉，其中所述叉包括引物结合补体序列和引物结合序列。
7.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述可切割位点和/或可切割位点的补体位于所述碱基配对的茎中。
8.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第二衔接子包括碱基配对的茎和环，其中所述环包括第二可切割位点。
9.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述至少一个可切割位点和/或可切割位点的补体是切刻核酸内切酶的限制性位点，其中优选地所述限制性位点是第二限制性位点。
10.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述第一衔接子还包括亲和标签。
11.一种用于测序的多核苷酸文库链，所述多核苷酸文库链包括第一衔接子、要鉴定的双链多核苷酸序列和第二衔接子；
12.根据权利要求11所述的多核苷酸文库链，其中所述第二衔接子包括至少一个可切割位点和/或可切割位点的补体，其中所述可切割位点和/或可切割位点的补体优选地是切刻核酸内切酶的限制性位点。
13.一种鉴定多核苷酸序列的至少第一区的方法，其中所述方法包括：
14.根据权利要求13所述的方法，其中鉴定包括确定第一区的序列和/或鉴定任何表观遗传修饰，其中所述表观遗传修饰优选地是经修饰的胞嘧啶。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中每个第一文库链和第二文库链包括引物结合补体序列、第一部分、第一衔接子序列、第二部分和引物结合序列，并且其中所述第一衔接子包括核酸内切酶的第一限制性位点。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述第一限制性位点是切刻核酸内切酶或限制性核酸内切酶的限制性位点。
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【专利技术属性】
技术研发人员：E·卡拉米，J·布特尔，O·米勒，A·卡鲁纳卡兰，S·布鲁因斯马，N·戈姆利，
申请(专利权)人：因美纳有限公司，
类型：发明
国别省市：
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