【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本总体上涉及分子病毒学和免疫学领域。特别地，本公开文本涉及产生功能性自复制rna(srrna)，例如复制子的新方法。更特别地，本公开文本涉及从非功能性正义单链rna(+ssrna)病毒基因组或非功能性srrna或者功能性和非功能性srrna的组合产生功能性srrna的方法。本公开文本还涉及含有此类功能性srrna的组合物。
技术介绍
1、近年来，已经将若干个不同的动物病毒群通过其基因组的同源重组或直接工程化进行基因操纵。dna和rna病毒两者的反向遗传系统的可用性已经为使用重组病毒(例如，作为疫苗、表达载体、抗肿瘤剂、基因疗法载体和药物递送媒介物)创造了新的前景。
2、许多基于病毒的表达载体已被部署用于在培养的重组细胞中表达异源蛋白，并且经修饰的病毒载体在宿主细胞中用于基因表达的应用不断扩大。这方面的最新进展包括进一步开发用于产生多亚基蛋白质复合物以及共表达蛋白质修饰酶的技术和系统以改善异源蛋白产生。关于病毒表达载体技术的其他最新进展包括用于控制基因表达、制备病毒载体、体内基因疗法应用以及产生疫苗递送载体的许多先进的...
【技术保护点】
1.一种用于产生功能性自复制RNA(srRNA)的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个RNA聚合酶终止位点或隐蔽终止位点包括(i)噬菌体T7终止位点或隐蔽T7终止位点；和/或(ii)SP6 RNA聚合酶终止位点或SP6RNA聚合酶隐蔽终止位点。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述多个核酸片段各自的长度为约60个核苷酸至约5,000个核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述多个核酸片段是单链或双链核酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于产生功能性自复制rna(srrna)的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一个或多个rna聚合酶终止位点或隐蔽终止位点包括(i)噬菌体t7终止位点或隐蔽t7终止位点；和/或(ii)sp6 rna聚合酶终止位点或sp6rna聚合酶隐蔽终止位点。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，其中所述多个核酸片段各自的长度为约60个核苷酸至约5,000个核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述多个核酸片段是单链或双链核酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述从头功能性srrna组装物缺乏编码一种或多种病毒结构蛋白的核酸序列的至少一部分。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述从头功能性srrna组装物缺乏编码一种或多种病毒结构蛋白的核酸序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述从头功能性srrna组装物缺乏编码一种或多种病毒结构蛋白的核酸序列的很大一部分。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述从头功能性srrna组装物不包含编码病毒结构蛋白的核酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述一种或多种+ssrna病毒基因组或srrna中的至少一种是属于披膜病毒科(togaviridae)的甲病毒属(alphavirus)的病毒的+ssrna病毒基因组或srrna。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述一种或多种+ssrna病毒基因组或srrna中的至少一种是属于veev/eeev群、或sfv群、或sinv群的甲病毒物种的+ssrna病毒基因组或srrna。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述+ssrna病毒基因组或srrna中的至少一种是选自以下的甲病毒的+ssrna病毒基因组或srrna：东部马脑炎病毒(eeev)、委内瑞拉马脑炎病毒(veev)、大沼泽地病毒(evev)、穆坎布病毒(mucv)、皮克孙纳病毒(pixv)、米德尔堡病毒(midv)、基孔肯雅病毒(chikv)、阿良良病毒(onnv)、罗斯河病毒(rrv)、巴马森林病毒(bf)、盖他病毒(get)、鹭山病毒(sagv)、贝巴鲁病毒(bebv)、马雅罗病毒(mayv)、乌纳病毒(unav)、辛德比斯病毒(sinv)、奥拉病毒(aurav)、怀塔罗瓦病毒(whav)、巴班肯病毒(babv)、孜拉加奇病毒(kyzv)、西部马脑炎病毒(weev)、高地j病毒(hjv)、摩根堡病毒(fmv)、恩杜姆病毒(nduv)、马达里亚加病毒(madv)和博吉河病毒。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述+ssrna病毒基因组或srrna中的至少一种是以下的+ssrna病毒基因组或srrna：东部马脑炎病毒(eeev)、基孔肯雅病毒(chikv)、辛德比斯病毒(sinv)、委内瑞拉马脑炎病毒(vee)、马达里亚加病毒(madv)、西部马脑炎病毒(weev)或塞姆利基森林病毒(sfv)。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将编码异源基因的核酸序列掺入所述从头srrna组装物中。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述异源基因可操作地连接至亚基因组(sg)启动子。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述sg启动子是26s亚基因组启动子。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括从一种或多种所述+ssrna基因组或srrna去除一个或多个限制性酶切位点。
17.根据权利要求16所述的方法，其中至少一个所去除的限制性酶切位点由限制性酶识别，所述限制性酶适合于所述从头srrna组装物的线性化或者适合于将所述异源基因插入所述从头srrna组装物中。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所产生的功能性srrna组装物包含3'聚腺苷酸束(聚(a)尾)。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述3'聚(a)尾包含至少11个腺嘌呤核苷酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括用来自所述+ssrna病毒基因组的不同物种、亚种或毒株的非翻译区(utr)替代所述从头srrna组装物中的一个或多个utr。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法包括替代3'utr。
22.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法包括替代5'utr。
23.根据权利要求20所述的方法，其中所述方法包括替代3'utr和5'utr。
24.根据权利要求20至23中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择来自+ssrna病毒的毒性物种或无毒性物种的所述utr。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括用异源nsp替代所述从头srrna组装物中的非结构蛋白(nsp)或其部分。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述异源nsp或其部分来自另一种+ssrna病毒物种、亚种或毒株。
27.根据权利要求25所述的方法，其中所述nsp或其部分源自相同+ssrna病毒物种的另一种毒株。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述nsp或其部分是nsp1、nsp2、nsp3、nsp4或其任一种的一部分。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括选择来自+ssrna病毒的毒性物种或无毒性物种的所述nsp。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·S·王，S·J·米亚克斯通纳，
申请(专利权)人：瑞普利科特生物科学公司，
类型：发明
国别省市：
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