一种基于RPA-CRISPR/Cas12a快速检测沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术提供了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a快速检测沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法，属于食源性致病菌可视化快速检测技术领域。本发明专利技术以沙门氏菌基因组中的特异性目的基因为靶点，设计并优化得到RPA引物对和特异性crRNA序列，并提供了一种快速可视化检测沙门氏菌的方法，检测结果可在蓝光下肉眼判读，具有灵敏度高、特异性强、结果准确、耗时短、操作简单、成本低和实用性高的特点，适于现场快速筛查或检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食源性致病菌可视化快速检测，具体涉及一种基于rp a-crispr/cas12a快速检测沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法。

技术介绍

1、沙门氏菌(salmonella)是一种常见的食源性致病菌。沙门氏菌病是由沙门氏菌属细菌引起的人畜共患性疾病，人类通过摄食受污染的动物产品可引起败血症、胃肠炎、食物中毒、伤寒、副伤寒及肠外灶性感染等多种疾病。沙门氏菌常常寄居在人和动物体内，特别是家禽、家畜及宠物的肠道中，未经妥善处理的粪便中残留的沙门氏菌可生存5个月至2年之久，对环境卫生、人类身体健康及生命财产安全都构成了严重威胁。

2、目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养法、免疫学法、分子生物学法、基于质谱分析的方法、基于光谱分析的方法和基于生物传感器的方法。具体包括：酶联免疫吸附实验(elisa)、侧向流动免疫分析(lfia)和侧向流动免疫分析(lfia)；聚合酶链反应(pcr)、环介导等温扩增技术(lamp)、多位点序列分型(mlst)和crispr分型；基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(maldi-tof-ms)和液相色谱-质谱(lc-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种快速检测沙门氏菌的RPA引物组，其特征在于，包括正向RPA扩增引物F1和反向RPA扩增引物R1；所述F1的序列如SEQ ID NO：1所示，所述R1的序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种快速可视化检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的RPA引物组和crRNA，所述crRNA的序列如SEQ ID NO：3所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括ssDNA reporter和Cas12a蛋白。

4.权利要求1所述的RPA引物组或权利要求2～3任意一项所述的试剂盒在制备快速检测沙门氏菌产品中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种快速检测沙门氏菌的rpa引物组，其特征在于，包括正向rpa扩增引物f1和反向rpa扩增引物r1；所述f1的序列如seq id no：1所示，所述r1的序列如seq id no：2所示。

2.一种快速可视化检测沙门氏菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的rpa引物组和crrna，所述crrna的序列如seq id no：3所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括ssdna reporter和cas12a蛋白。

4.权利要求1所述的rpa引物组或权利要求2～3任意一项所述的试剂盒在制备快速检测沙门氏菌产品中的应用。

5.一种非诊断目的的快速可视化检测沙门氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取样本dna，采用权利要求1所述的rpa引...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭璐，申锋，梁佳音，王强，魏孝承，刘芳，
申请(专利权)人：农业农村部环境保护科研监测所，
类型：发明
国别省市：