MAGE-A4 T细胞受体及其使用方法技术

本发明专利技术提供了与HLA呈递癌‑睾丸抗原黑色素瘤相关抗原A4(MAGE‑A4)肽特异性结合的分离T细胞受体(TCR)以及使用这些分离TCR的治疗和诊断方法。本发明专利技术提供了在MHC(HLA‑A2)的情况下为对抗MAGE‑A4肽抗原而产生的T细胞受体(TCR)。在报告基因检测中，已确定的独特TCR序列可与HLA分子沟中的小肽MAGE‑A4特异性结合，并活化T细胞。

【技术实现步骤摘要】

技术介绍

1、t细胞受体(tcr)为膜结合异二聚体，包含一条类似于免疫球蛋白可变区(v)和恒定区(c)的α链和β链。所述tcrα链包含一条共价连接至c-α链的v-α链，而所述β链包含一条共价连接至c-β链的v-β链。所述v-α链和v-β链形成一个囊袋或裂缝，在主要组织相容性复合物(mhc)(在人类中称为hla复合体)的情况下可结合抗原。(davis，《免疫学年评》，3:537(1985年)；《基础免疫学》第3版，w.paul(编辑)，纽约(1993年))。

2、tcr是免疫系统的主要效应子，作为治疗药物开发平台，具有独特的优势。虽然抗体治疗药物仅限于识别血液和胞外空间中的病原体，或细胞表面的蛋白靶点，但是，t细胞受体可识别随细胞表面mhc分子呈递的抗原，包括源自胞内蛋白的抗原。根据识别所呈递的抗原并被激活的t细胞亚型，tcr可参与各种免疫应答控制。例如，t细胞通过诱导b细胞分化成抗体产生细胞，参与体液免疫应答调控。此外，活化t细胞可启动细胞介导免疫应答。此外，据报告，tcr可介导细胞杀伤作用、增加b细胞增殖并影响癌症、过敏、病毒感染和自身免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种与HLA-A2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(MAGE-A4)肽(包含氨基酸序列KVLEHVVRV(SEQ ID NO:609))(MAGE-A4 286-294)特异性结合的T细胞受体(TCR)，其中，所述TCR包含一个α链可变结构域，所述α链可变结构域包含一个互补决定区(CDR)3，其中，所述CDR3包含公式I的氨基酸序列：

2.根据权利要求1所述的TCR，其中，N1为Ala、Ile或Gly。

3.一种与HLA-A2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(MAGE-A4)肽(包含氨基酸序列KVLEHVVRV(SEQ ID NO:609))(MAGE-A...

【技术特征摘要】

1.一种与hla-a2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(mage-a4)肽(包含氨基酸序列kvlehvvrv(seq id no:609))(mage-a4 286-294)特异性结合的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含一个α链可变结构域，所述α链可变结构域包含一个互补决定区(cdr)3，其中，所述cdr3包含公式i的氨基酸序列：

2.根据权利要求1所述的tcr，其中，n1为ala、ile或gly。

3.一种与hla-a2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(mage-a4)肽(包含氨基酸序列kvlehvvrv(seq id no:609))(mage-a4 286-294)特异性结合的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含一个β链可变结构域，所述β链可变结构域包含互补决定区(cdr)3，其中，所述cdr3包含公式ii的氨基酸序列：

4.根据权利要求1或2所述的tcr，其中，所述α链可变结构域进一步包含一个cdr1和一个cdr2，其中，所述cdr1包含表2中所列的任一α链可变结构域cdr1氨基酸序列，所述cdr2单独包含表2中所列的任一α链可变结构域cdr2氨基酸序列。

5.根据权利要求3所述的tcr，其中，所述β链可变结构域进一步包含一个cdr1和一个cdr2，其中，所述cdr1包含表2中所列的任一β链可变结构域cdr1氨基酸序列，所述cdr2单独包含表2中所列的任一β链可变结构域cdr2氨基酸序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的tcr，其中，所述tcr包含至少一个tcrα链可变结构域和/或至少一个β链可变结构域。

7.根据权利要求6所述的tcr，其中，所述tcr包含一个tcrα链可变结构域和一个tcrβ链可变结构域。

8.根据权利要求3-7中任一项所述的tcr，包含α链可变结构域cdr1、cdr2和cdr3(包含在表4中所列的任一α链可变结构域序列内)；以及β链可变结构域cdr1、cdr2和cdr3(包含在表4中所列的任一β链可变结构域序列内)。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的tcr，包含一个α链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列α链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的tcr，包含一个β链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列β链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的tcr，包含：(a)一个α链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列α链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性；以及(b)一个β链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列β链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

12.根据权利要求3-11中任一项所述的tcr，包含：

13.根据权利要求12所述的tcr，包含一个从包括以下几项的一组中选择的α链可变结构域/β链可变结构域氨基酸序列对：seq id no:7/15、23/31、39/47、55/63、71/79、87/95、103/111、119/127、135/143、151/159、167/175、183/191、199/207、215/223、231/239、247/255、263/271、279/287、295/303、311/319、327/335、343/351、359/367、375/383、391/399、407/415、423/431、439/447、455/463、471/479、487/495、503/511、519/527、535/543、551/559、567/575、583/591和599/607。

14.根据权利要求12所述的tcr，包含一个从包括以下几项的一组中选择的α链可变结构域/β链可变结构域氨基酸序列对：seq id no:87/31、23/95、231/607、231/223、231/591、231/255、231/271、231/79、231/47、231/399、599/239、599/223、599/591、599/255、599/271、599/79、599/47、599/399、215/239、215/607、215/591、215/255、215/271、215/79、215/47、215/399、583/239、583/607、583/223、583/255、583/271、583/79、583/47、583/399、247/239、247/607、247/223、247/591、247/271、247/79、247/47、247/399、263/239、263/607、263/223、263/591、263/255、263/79、263/47、263/399、71/239、71/607、71/223、71/591、71/255、71/271、71/47、71/399、39/239、39/607、39/223、39/591、39/255、39/271、39/79、39/399、391/239、391/607、391/223、391/591、391/255、391/271、391/79、391/47、439/127、439/319、439/287、439/15、439/111、439/383、439/191、439/511、439/527、439/559、439/207、119/447、119/319、119/287、119/15、119/111、119/383、119/191、119/511、119/527、119/559、119/207、311/447、311/127、311/287、311/15、311/111、311/383、311/191、311/511、311/527、311/559、311/207、279/447、279/127、279/319、279/15、279/111、279/383、279/191、279/511、279/527、279/559、279/207、7/447、7/127、7/319、7/287、7/111、7/383、7/191、7/511、7/527、7/559、7/207、103/447、103/127、103/319、103/287、103/15、103/383、103/191、103/511、103/527、103/559、103/207、375/447、375/127、375/319、375/287、375/15、375/111、375/191、375/511、375/527、375/559、375/207、183/447、183/127、183/319、183/287、183/15、183/111、183/383、183/511、183/527、183/559、183/207、503/447、503/127、503/319、503/287、503/15、503/111、503/383、503/191、503/527、503/559、503/207、519/447、519/127、519/319、519/287、519/15、519/111、519/383、519/191、519/511、519/559、519/207、551/447、551/127、551/319、551/287、551/15、551/111、551/383、551/191、551/511、551/527、551/207、199/447、199/127、199/319、199/287、199/15、199/111、199/383、199/191、199/511、199/527和199/559。

15.一种竞相与权利要求1-14中任一项所述的tcr结合的tcr。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的tcr，进一步包含一个可检测部分。

17.一种药物合成物，包含权利要求1-16中任一项所述的tcr和一种可药用载体或稀释剂。

18.一种呈递权利要求1-16中任一项所述tcr的分离细胞。

19.一种包含一个多核苷酸序列(对权利要求1-16中任一项所述tcr的α链可变结构域进行编码)的分离多核苷酸分子。

20.一种包含一个多核苷酸序列(对权利要求1-16中任一项所述tcr的β链可变结构域进行编码)的分离多核苷酸分子。

21.一种包含权利要求19或20所述多核苷酸分子的载体。

22.一种表达权利要求21所述载体的分离细胞。

23.一种mage-a4相关疾病或障碍受试者的治疗方法，包括向受试者施用治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的tcr、权利要求17所述的药物合成物或权利要求18所述的多个分离细胞，从而对受试者进行治疗。

24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述mage-a4相关疾病或障碍为mage-a4相关癌症。

25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述mage-a4相关癌症为脂肪肉瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、黑色素瘤、转移性黑色素瘤、滑膜肉瘤、膀胱癌、食管癌、食管鳞状细胞癌、肝细胞癌、头颈癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、前列腺癌、乳腺癌、星形细胞肿瘤、多形性成胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤、脑肿瘤、输卵管癌、原发性腹膜腔癌、晚期实体瘤、软组织肉瘤、肉瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、多发性骨髓瘤、转移性实体瘤、结直肠癌、胃癌、横纹肌肉瘤、黏液样圆细胞脂肪肉瘤或复发性非小细胞肺癌。

26.根据权利要求23-25中任一项所述的方法，其中，向受试者联合施用所述tcr、药物合成物或多个细胞以及第二治疗剂。

27.根据权利要求23-26中任一项所述的方法，其中，通过皮下、静脉内、皮内、腹腔内、口服、肌肉内或颅内途径向受试者施用所述tcr、药物合成物或多个细胞。

28.一种对t细胞受体(tcr)进行编码的多核苷酸分子，其中，所述tcr与hla-a2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(mage-a4)肽(包含氨基酸序列kvlehvvrv(seq id no:609))(mage-a4 286-294)特异性结合，其中，所述tcr具有从包括以下几项的一组中选择的一种特性：(a)不与表达预测脱靶肽的细胞结合(通过发光检测确定)；(b)t细胞应答激活作用约是源自患者的mage-a4特异性tcr的两倍(通过tcr介导的t细胞信号传导发光生物检测确定)；以及(c)t细胞应答激活作用约是亲和力成熟的(例如，通过噬菌体呈递)mage-a4特异性tcr的两倍(通过tcr介导的t细胞信号传导发光生物检测确定)。

29.根据权利要求28所述的多核苷酸分子，对至少一个tcrα链可变结构域和/或至少一个β链可变结构域进行编码。

30.根据权利要求28所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含α链可变结构域互补决定区(cdr)1、cdr2和cdr3(包含在表4中所列的任一α链可变结构域序列内)；以及β链可变结构域cdr1、cdr2和cdr3(包含在表4中所列的任一β链可变结构域序列内)。

31.根据权利要求29或30所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含α链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列α链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

32.根据权利要求28-31中任一项所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含β链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列β链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

33.根据权利要求28-32中任一项所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含(a)一个α链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列α链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性；以及(b)一个β链可变结构域，其氨基酸序列与表4中所列β链可变结构域氨基酸序列中任一氨基酸序列的整条氨基酸序列具有至少85％的氨基酸一致性。

34.根据权利要求28-33中任一项所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含：

35.根据权利要求34所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含一个从包括以下几项的一组中选择的α链可变结构域/β链可变结构域氨基酸序列对：seq id no:7/15、23/31、39/47、55/63、71/79、87/95、103/111、119/127、135/143、151/159、167/175、183/191、199/207、215/223、231/239、247/255、263/271、279/287、295/303、311/319、327/335、343/351、359/367、375/383、391/399、407/415、423/431、439/447、455/463、471/479、487/495、503/511、519/527、535/543、551/559、567/575、583/591和599/607。

36.根据权利要求34所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含一个从包括以下几项的一组中选择的α链可变结构域/β链可变结构域氨基酸序列对：seq id no:87/31、23/95、231/607、231/223、231/591、231/255、231/271、231/79、231/47、231/399、599/239、599/223、599/591、599/255、599/271、599/79、599/47、599/399、215/239、215/607、215/591、215/255、215/271、215/79、215/47、215/399、583/239、583/607、583/223、583/255、583/271、583/79、583/47、583/399、247/239、247/607、247/223、247/591、247/271、247/79、247/47、247/399、263/239、263/607、263/223、263/591、263/255、263/79、263/47、263/399、71/239、71/607、71/223、71/591、71/255、71/271、71/47、71/399、39/239、39/607、39/223、39/591、39/255、39/271、39/79、39/399、391/239、391/607、391/223、391/591、391/255、391/271、391/79、391/47、439/127、439/319、439/287、439/15、439/111、439/383、439/191、439/511、439/527、439/559、439/207、119/447、119/319、119/287、119/15、119/111、119/383、119/191、119/511、119/527、119/559、119/207、311/447、311/127、311/287、311/15、311/111、311/383、311/191、311/511、311/527、311/559、311/207、279/447、279/127、279/319、279/15、279/111、279/383、279/191、279/511、279/527、279/559、279/207、7/447、7/127、7/319、7/287、7/111、7/383、7/191、7/511、7/527、7/559、7/207、103/447、103/127、103/319、103/287、103/15、103/383、103/191、103/511、103/527、103/559、103/207、375/447、375/127、375/319、375/287、375/15、375/111、375/191、375/511、375/527、375/559、375/207、183/447、183/127、183/319、183/287、183/15、183/111、183/383、183/511、183/527、183/559、183/207、503/447、503/127、503/319、503/287、503/15、503/111、503/383、503/191、503/527、503/559、503/207、519/447、519/127、519/319、519/287、519/15、519/111、519/383、519/191、519/511、510/559、519/207、551/447、551/127、551/319、551/287、551/15、551/111、551/383、551/191、551/511、551/527、551/207、199/447、199/127、199/319、199/287、199/15、199/111、199/383、199/191、199/511、199/527和199/559。

37.根据权利要求33所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含：

38.根据权利要求37所述的多核苷酸分子，其中，所述tcr包含一个从包括以下几项的一组中选择的α链可变结构域/β链可变结构域核酸序列对：seq id no:8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、264/272、280/288、296/304、312/320、328/336、344/352、360/368、376/384、392/400、408/416、424/432、440/448、456/464、472/480、488/496、504/512、520/528、536/544、552/560、568/576、584/592、600/608。

39.一种包含权利要求28-38中任一项所述多核苷酸分子的载体。

40.一种包含权利要求39所述载体的分离细胞。

41.一种mage-a4相关疾病或障碍受试者的治疗方法，包括向受试者施用权利要求40所述的多个细胞，从而对受试者进行治疗。

42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述mage-a4相关疾病或障碍为mage-a4相关癌症。

43.根据权利要求43所述的方法，其中，所述mage-a4相关癌症为脂肪肉瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、黑色素瘤、转移性黑色素瘤、滑膜肉瘤、膀胱癌、食管癌、食管鳞状细胞癌、肝细胞癌、头颈癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、前列腺癌、乳腺癌、星形细胞肿瘤、多形性成胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤、脑肿瘤、输卵管癌、原发性腹膜腔癌、晚期实体瘤、软组织肉瘤、肉瘤、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金病、多发性骨髓瘤、转移性实体瘤、结直肠癌、胃癌、横纹肌肉瘤、黏液样圆细胞脂肪肉瘤或复发性非小细胞肺癌。

44.根据权利要求41-43中任一项所述的方法，其中，向受试者联合施用所述多个细胞以及第二治疗剂。

45.一种与hla-a2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(mage-a4)肽(包含氨基酸序列gvydgrehtv(seq id no:612))(mage-a4 230-239)特异性结合的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含一个互补决定区3(cdr3)，所述互补决定区3(cdr3)包含在以下任一序列的一个α链可变结构域内：seq id no:620、636、652、668、684、700、716、732、748、764、780、796、812、828、844和860。

46.一种与hla-a2呈递癌-睾丸抗原黑色素瘤相关抗原4(mage-a4)肽(包含氨基酸序列gvydgrehtv(seq id no:612))(mage-a4 230-239)特异性结合的t细胞受体(tcr)，其中，所述tcr包含一个互补决定区3(cdr3)，所述互补决定区3(cdr3)包含在以下任一序列的一个β链可变...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·鲍尔曼，C·古雷尔，J·汉森，
申请(专利权)人：里珍纳龙药品有限公司，
类型：发明
国别省市：