将目的基因导入免疫细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种在免疫细胞，更具体地说是自然杀伤细胞中使用病毒载体有效表达目的基因的方法。未添加酶或小分子的情况下，通过在转导前添加一个简单的冷冻和解冻自然杀伤细胞的步骤，本发明专利技术能够显著提升病毒载体的转导效率。尤其是，本发明专利技术显著提高在自然杀伤细胞中基因转移效率较低的慢病毒载体的效率，由此，可以有效用于制备导入具有所需性状的基因的自然杀伤细胞，以最大限度地提高该细胞对于免疫疗法的功能、活性和生产力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及一种方法，即通过冷冻和解冻细胞来提高免疫细胞，特别是自然杀伤细胞中经由病毒载体的目的基因转导效率。

技术介绍

1、自然杀伤(nk)细胞是淋巴细胞，约占血细胞的15％，在针对恶性细胞的先天免疫防御中起着重要作用。具体地，自然杀伤细胞激活树突细胞并诱导细胞毒性t淋巴细胞(ctl)对肿瘤特异性起反应，以消除肿瘤细胞，特别是直接杀死恶性肿瘤，如肉瘤、骨髓瘤、癌、淋巴瘤和白血病。然而，使用自然杀伤细胞的免疫细胞治疗受到体外扩增困难和患者之间自然杀伤细胞活性差异的限制。

2、同时，在t细胞的免疫细胞疗法中，正在开发重新编程自身免疫细胞以表达嵌合抗原受体的方法，以提高对特定癌症的有效性或克服癌细胞对治疗的抵抗。这些嵌合抗原受体最近已被应用于自然杀伤细胞。此外，在使用同种异体自然杀伤细胞的治疗中，需要引入外源基因或抑制或过表达内在基因，以最大限度地发挥其作为免疫治疗细胞的功能和活性，例如表达细胞因子il-2以诱导nk细胞增殖，从而解决移植的nk细胞在受者中的持续时间短的问题；或抑制nk细胞上的抑制性受体(如kir)以阻断受体的免疫反应。然而，自然本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种在免疫细胞中表达目的基因的方法，所述方法包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(a)之前将从对象处分离的免疫细胞体外培养6至11天。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(b)之后将解冻的免疫细胞培养2-4天。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞选自T细胞、自然杀伤(NK)细胞和自然杀伤T(NKT)细胞组成的组。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因递送系统是病毒载体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述病毒选自由慢病毒、腺病毒...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种在免疫细胞中表达目的基因的方法，所述方法包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(a)之前将从对象处分离的免疫细胞体外培养6至11天。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(b)之后将解冻的免疫细胞培养2-4天。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞选自t细胞、自然杀伤(nk)细胞和自然杀伤t(nkt)细胞组成的组。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因递送系统是病毒载体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述病毒选自由慢病毒、腺病毒、腺相关病毒(aav)、逆转录病毒、单纯疱疹病毒和牛痘病毒组成的组。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述病毒是慢病毒。

8.如权利要求1所述的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：金汉率，金炫娥，崔恩智，金宥善，金恩智，金孝珍，南亨辰，韩昇烈，闵普庆，林虎勇，黄琉炅，
申请(专利权)人：株式会社GC细胞，
类型：发明
国别省市：