牛奶中耐药基因的微滴式数字PCR检测方法技术

牛奶中耐药基因的微滴式数字PCR检测方法，属于耐药基因检测领域，包括：配制ddPCR反应混合液：ddPCR Supermix、上游引物、下游引物、探针、DNA模板和ddH<subgt;2</subgt;O；微滴生成；PCR扩增；荧光信号读取和QuantaSoft软件定量分析结果。本发明专利技术通过建立牛奶中耐药基因的ddPCR检测方法，能够完成牛奶中耐药基因的绝对定量分析并检测出较低的检出限，ddPCR能检出低至0.06copies/μL耐药基因的存在，明确了耐药基因的最低检测限。本发明专利技术与其他各耐药基因检测均不存在交叉反应，特异性良好，并且各组间变异系数范围在0.26％‑0.81％之间，重复性良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于耐药基因检测，具体涉及一种牛奶中耐药基因的微滴式数字pcr检测方法。

技术介绍

1、目前，数字pcr的主要应用形式涵盖了芯片数字pcr和微滴式数字pcr两大类。这两种形式均能有效地将核酸样品分配至大量独立且平行的微反应单元中，确保每个反应单元内尽可能仅含有一个模板分子，并在此基础上进行扩增、检测和分布统计，从而实现靶标分子的绝对计数。在应用领域方面，数字pcr的广泛应用体现在多个方面，包括基因不稳定分析、产前诊断、微生物方面的检测、转基因方面检测和dna测序等领域。在食品安全检测领域中的应用也很多，包括以下几个方面：食源性致病菌检测研究、动物、植物源性成分检测研究、转基因成分检测研究和食源性病毒检测研究。

2、微滴式数字pcr(ddpcr)技术作为dpcr的一种形式，其操作过程主要包括液滴生成、扩增和荧光信号分析这三个部分。在液滴生成阶段，微滴发生器发挥着关键作用，它能够将含有核酸分子的荧光定量pcr反应体系转化成微小的液滴。每个微滴都相当于一个独立的pcr反应器，这意味着pcr反应可以在这些微小的、隔离的环境中独立进行。在pcr本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.牛奶中耐药基因的微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的牛奶中耐药基因的微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，所述ddPCR反应混合液的总体积为22μL，其中，ddPCR Supermix 11μL，上游引物1.8μL，下游引物1.8μL，探针0.5μL，DNA模板2.2μL，ddH2O 4.7μL。

3.根据权利要求1所述的牛奶中耐药基因的微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，所述牛奶中耐药基因为AAC(6')-Ie、AAC(3)-IIa、ANT(6)-Ia、APH(6)-Id、APH(3”)-Ib、tetA、tetB、...

【技术特征摘要】

1.牛奶中耐药基因的微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的牛奶中耐药基因的微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，所述ddpcr反应混合液的总体积为22μl，其中，ddpcr supermix 11μl，上游引物1.8μl，下游引物1.8μl，探针0.5μl，dna模板2.2μl，ddh2o 4.7μl。

3.根据权利要求1所述的牛奶中耐药基因的微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，所述牛奶中耐药基因为aac(6')-ie、aac(3)-iia、ant(6)-ia、aph(6)-id、aph(3”)-ib、teta、tetb、tetd、teto和tets。

4.根据权利要求3所述的牛奶中耐药基因的微滴式数字pcr检测方法，其特征在于，所述耐药基因aac(6')...

【专利技术属性】
技术研发人员：王楠，宋延来，安冬，王改丽，孙兴忠，冯凯，呼延含蓉，崔鹤馨，尚丽元，郝良玉，王向辉，
申请(专利权)人：吉林省畜牧兽医科学研究院，
类型：发明
国别省市：