一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液及前处理方法技术

技术编号:43435712 阅读:10 留言:0更新日期:2024-11-27 12:43
本发明专利技术公开了一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液及前处理方法,包括体外采集健康公牛精液于冻精管中,存放于‑196℃保存;在800×g下离心3min,弃上清液;加入预混有蛋白酶K的裂解液按照体积比1:50至1:180混匀,震荡混匀,在56℃孵育8小时;孵育后,短暂离心,70℃孵育10min至液体完全透明,完成裂解进行核酸提取。本发明专利技术提取冷冻精液核酸灵敏度高,纯度符合要求,相比纯化学组成成分的裂解液来说安全性更高,蛋白酶K溶液酶解蛋白质,提取DNA效率效果更好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及精液裂解液,尤其涉及一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液及前处理方法


技术介绍

1、精液冷冻保存是将精液经过特殊处理,添加保护剂后,保存在超低温下(通常采用液氮-196℃保存),其优点在于可长期保存,便于运输,且使用不受时间、地域以及雄性动物寿命的限制。相较于牛群的组织、血液等样本,体外采取精液更溶液获取且精液冷冻更有利于样本保存。

2、精液本身是一种粘稠的液体混合物,由精浆和精子细胞组成。精浆组分复杂,含有大量水、脂类、多糖类物质和蛋白质,以及酶类、无机盐和有机小分子等。成熟精子细胞的细胞核染色质更高度致密、成分复杂且粘稠度极高。加之精液经过冷冻后,性质略有改变,精子活力降低。因此,从冷冻精液中提取核酸物质比从组织、血液中提取更为困难。

3、目前市售的动物组织提取试剂盒多为组织、血液样本提取试剂盒,对于冷冻精液这种特殊样本,不能达到很好的裂解效果,为了更好地开展对牛精液样本的研究,亟需一种能提高牛冷冻精液核酸提取质量及灵敏度的精液裂解液与样品前处理方法。


技术实现思

<本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述裂解液成分包括体积比为1:1:3:6:1蛋白酶k溶液、二硫苏糖醇溶液、十二烷基磺酸钠溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、氯化钾溶液。

2.根据权利要求1所述的一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述十二烷基磺酸钠溶液质量百分比为0.3%-0.5%。

3.根据权利要求1所述的一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液浓度为80-120mmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述蛋白酶k溶液为...

【技术特征摘要】

1.一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述裂解液成分包括体积比为1:1:3:6:1蛋白酶k溶液、二硫苏糖醇溶液、十二烷基磺酸钠溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、氯化钾溶液。

2.根据权利要求1所述的一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于,所述十二烷基磺酸钠溶液质量百分比为0.3%-0.5%。

3.根据权利要求1所述的一种用于牛冷冻精液核酸提取的精液裂解液,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘沂霖邵洪泽王楠侯绪森李琳袁陆刘云志王改丽
申请(专利权)人:吉林省畜牧兽医科学研究院
类型:发明
国别省市:

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