一种分泌表达β-半乳糖苷酶的大肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种分泌表达β‑半乳糖苷酶的大肠杆菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术公开的大肠杆菌在出发菌株中使用pET28a载体异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种来源的β‑半乳糖苷酶，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。表达体系中添加8‑30mM浓度的乳糖诱导16‑28小时，使该重组大肠杆菌胞外表达β‑半乳糖苷酶，制备得到的β‑半乳糖苷酶水解活性最高达到1.3×10<supgt;5</supgt;U/mL，能够应用于以乳糖为底物合成低聚半乳糖，乳糖的转化率达到98％，低聚半乳糖的生成率达到71％，且具有良好的聚合度。本发明专利技术提供的大肠杆菌及其分泌表达的高活性β‑半乳糖苷酶具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，尤其是指一种分泌表达β-半乳糖苷酶的大肠杆菌及其应用。

技术介绍

1、β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,ec 3.2.1.23)属于水解酶类，同时具有转移酶类性质，一方面β-半乳糖苷酶可以催化乳糖水解生成葡萄糖和半乳糖，另一方面还可以催化半乳糖基转移至乳糖等受体上的转糖基反应。像常用的益生元—低聚半乳糖(galactooligosaccharides，gos)就是以乳糖为底物，利用β-半乳糖苷酶的转糖基反应，所产生的具有不同聚合度和糖苷键的复杂低聚糖混合物。gos作为经典的益生元，可不被水解或消化直接从人体上肠道到达大肠，选择性促进肠道中有益菌双歧杆菌和乳杆菌等的生长，并抑制肠道致病菌的生长，从而改善肠道菌群的组成，对免疫反应和代谢综合征标志物产生积极作用。

2、乳杆菌来源的β-半乳糖苷酶在生产gos方面具有非常重要的价值，是β-半乳糖苷酶较好的来源，自从它们被发现以来一直倍受关注。首先乳杆菌是“一般认为安全(generally recognized as safe)的”微生物，在食品发酵领域具有较长的应用本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效分泌表达β-半乳糖苷酶的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌在出发菌株中使用pET28a载体异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种来源的β-半乳糖苷酶。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌，其特征在于：所述β-半乳糖苷酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.包含权利要求1所述的大肠杆菌的微生物菌剂。

4.权利要求1所述的大肠杆菌或权利要求3所述的微生物菌剂在制备β-半乳糖苷酶中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：在表达体系中添加乳糖诱导所述大肠杆菌胞外表达β-半乳糖苷酶。

6.根据权利要求5所述的应用，...

【技术特征摘要】

1.一种高效分泌表达β-半乳糖苷酶的大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌在出发菌株中使用pet28a载体异源表达德氏乳杆菌保加利亚亚种来源的β-半乳糖苷酶。

2.根据权利要求1所述的大肠杆菌，其特征在于：所述β-半乳糖苷酶的核苷酸序列如seq id no.3所示。

3.包含权利要求1所述的大肠杆菌的微生物菌剂。

4.权利要求1所述的大肠杆菌或权利要求3所述的微生物菌剂在制备β-半乳糖苷酶中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：在表...

【专利技术属性】
技术研发人员：李恒，位薇，史劲松，龚劲松，蒋敏，苏畅，许正宏，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：