一种可控生产单双鼠李糖脂的工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种可控生产单双鼠李糖脂的工程菌及其构建方法和应用。所述工程菌包括缺失rhlC基因的假单胞菌，所述工程菌还含有重组表达载体，或基因组中整合有重组片段；所述重组表达载体和重组片段各自独立地含有rhlC基因，rhlC基因的启动子为诱导型启动子。本发明专利技术的鼠李糖脂生产菌株缺失rhlC基因，同时设计回补策略，构建的工程菌能可控生产不同比例单、双鼠李糖脂，且产量显著提高，此外通过对发酵培养过程进行优化设计，能够进一步提高鼠李糖脂的产量和纯度，鼠李糖脂的发酵浓度为88~98 g/L，产率为2.09~2.2 g/L/h，单、双鼠李糖脂比例为(77~88):23，有利于推动鼠李糖脂的广泛应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种可控生产单双鼠李糖脂的工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、鼠李糖脂是一种具有广泛生物活性的生物表面活性剂，在石油开采、环境修复、化妆品、医药等领域具有巨大的应用潜力。目前，鼠李糖脂的生产主要通过微生物发酵法实现，但产量和纯度受到多种因素的影响，已较难满足日益增长的需求。因此，开发一种高效、稳定的鼠李糖脂生产菌株具有重要意义。

2、鼠李糖脂是由1-2个呈亲水性的鼠李糖分子与1-2个呈疏水性的饱和或不饱和脂肪酸长链(c8−c16)通过β-糖苷键相连接的化学结构多样的同系物。在假单胞菌中，鼠李糖基转移酶i (rhamnosyltransferase i，rhlb)催化r-3-羟基脂肪酸(r-3-hydroxyfattyacids，haas)与dtdp-l-鼠李糖反应合成单鼠李糖脂(mono-rls)，单鼠李糖脂在鼠李糖基转移酶ⅱ (rhamnosyltransferase ⅱ, rhlc)的作用下与另一分子的dtdp-l-鼠李糖缩合成为双鼠李糖脂(di-rls)。通过控制特定酶能够实现合成单一鼠李糖脂，如有研究报本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述工程菌包括缺失rhlC基因的假单胞菌，所述工程菌还含有重组表达载体，或基因组中整合有重组片段；

2.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述假单胞菌包括荧光假单胞菌、铜绿假单胞菌或恶臭假单胞菌中任意一种。

3.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述诱导型启动子包括阿拉伯糖诱导型启动子。

4.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述重组表达载体的出发载体包括pHERD20T载体、pRK2013载体或pK18Gm载体中任意一...

【技术特征摘要】

1.一种可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述工程菌包括缺失rhlc基因的假单胞菌，所述工程菌还含有重组表达载体，或基因组中整合有重组片段；

2.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述假单胞菌包括荧光假单胞菌、铜绿假单胞菌或恶臭假单胞菌中任意一种。

3.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述诱导型启动子包括阿拉伯糖诱导型启动子。

4.根据权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌，其特征在于，所述重组表达载体的出发载体包括pherd20t载体、prk2013载体或pk18gm载体中任意一种。

5.一种权利要求1所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：

6.根据权利要求5所述的可控生产单双鼠李糖脂的工程...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘开开，杨付伟，姜西娟，石森，张雅萍，刘振兴，
申请(专利权)人：万华化学集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：