【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程生物，具体涉及猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株及其用途。
技术介绍
1、枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理，在芽孢状态下稳定性好，能耐氧化、耐挤压并且能长期耐60°c高温，在120°c温度下能存活20分钟，耐酸碱，在胃酸性环境中能保持活性，可以耐唾液和胆汁的攻击，是可100%直达大小肠的活菌。
2、干扰素是机体受病毒或其他因素刺激巨噬细胞、淋巴细胞及体细胞产生的具有高活性的多功能糖蛋白。对干扰素的研究迄今已有50多年历史，干扰素在生物基因工程研究方面取得的巨大进展，大大促进了干扰素生产工艺的改革，目前主要用于猪流行性腹泻、传染性胃肠炎、轮状病毒感染、猪瘟、蓝耳病、圆环病毒、伪狂犬病、猪流感、水疱病、细小病毒病等的防治，对猪的免疫抑制性疾病的防治效果突出。
3、随着生物技术和基因工程技术的发展，基因表达重组干扰素的生物技术现已相当成熟，尽管目前已有大批工程菌生产的干扰素已经投入市场，但在生产加工过程中仍然受各种条件影响，如需要完善发酵系统和简化纯化过程，需要提高产量和质量，以及需要制成制剂和运输陈本等问题，为减轻经济负担仍需要不断改善。目前现有的利用枯草芽孢杆菌表达猪干扰素的方法也存在问题，如选用的质粒并非适用于枯草芽孢杆菌的质粒，质粒中的启动子并非枯草芽孢杆菌启动子从而产生的干扰素表达量低，表达的干扰素需要纯化、制备成制剂运输以
4、此外，现有的表达重组干扰素的工程菌基本为外源表达，并且需要在有诱导的情况下才可以大量分泌干扰素，外源表达的干扰素多为注射给药，当通过口服的方式饲喂动物时，在干扰素到达动物肠道前就会发生降解，使得最终真正在肠道内发挥作用或者被肠道吸收利用的干扰素含量减少，降低治疗免疫抑制性疾病的效果。
技术实现思路
1、根据上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株及其用途。本专利技术通过将密码子优化后的猪源干扰素基因与pht-43改造质粒重组，电转化至枯草芽孢杆菌中获得一种分泌表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株。该菌株可直接定植在猪体内，使宿主体内干扰素水平长期处于最佳状态，因此可获得对病毒长期或终身免疫。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术第一方面，提供了一种pht-43改造质粒，所述pht-43改造质粒通过将pht-43质粒中的诱导型启动子替换为seq id no.1所示的p43启动子获得。
4、本专利技术第二方面，提供了上述pht-43改造质粒在制备可在肠道内稳定定植并分泌干扰素的定植菌株中的应用。
5、本专利技术第三方面，提供了一种猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，所述枯草芽孢杆菌肠道定植菌株由如下方法制备而成:
6、（1）将猪源干扰素基因连接到上述pht-43改造质粒上，获得重组质粒；
7、（2）将重组质粒电转化至枯草芽孢杆菌中，获得分泌表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株。
8、步骤（1）中所述猪源干扰素基因为密码子优化后的猪源ifn-α干扰素基因，其核苷酸序列如seq id no.4所示。
9、步骤（2）中所述枯草芽孢杆菌为wb800n枯草芽孢杆菌。
10、所述枯草芽孢杆菌肠道定植菌株可通过饮水、食物添加、构建生物制剂等方式直接定植在猪体内，在猪体内随着枯草芽孢杆菌肠道定植菌株的复制和表达不断产生干扰素。
11、本专利技术第四方面，提供了上述枯草芽孢杆菌肠道定植菌株在如下（1）或（2）中的应用：
12、（1）制备具有广谱抗病毒作用的生物制品；
13、（2）制备具有免疫调节作用的生物制品。
14、所述生物制品为表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌口服液、表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠溶胶囊、表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌片、表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌冻干粉、表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌膏、表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌散中的任一种。
15、本专利技术第五方面，提供了一种表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌冻干粉，所述枯草芽孢杆菌冻干粉由如下方法制备而成：
16、将上述制备的猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，经传代培养后，通过冻干使其含水量少于3％，得到表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌冻干粉。
17、本专利技术的有益效果：
18、1. 本专利技术利用的pht-43质粒是针对枯草芽孢杆菌的一种分泌型质粒，选用更适用于枯草分泌表达的wb800n菌株可以将表达的蛋白质分泌到菌体外，通过对pht-43质粒的改造，将pht-43的诱导型启动子更换为枯草芽孢杆菌自身存在的p43启动子使得质粒在不需要有诱导的情况下就可以在猪肠道内大量分泌干扰素，并且分泌的干扰素既可以在肠道发挥作用又可以经肠道吸收提高机体整体的干扰素水平，从而起到抗病毒效果。
19、2.本专利技术制备的分泌表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，可直接稳定定植在猪体内，在猪体内随着定植菌的复制和表达不断地产生干扰素，使宿主体内干扰素水平长期处于最佳状态，不仅省去了干扰素在体外制造、运输和使用的困难，降低了生产成本和使用成本，还能够使宿主获得对病毒长期或终身免疫。
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1.一种猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌肠道定植菌株由如下方法制备而成:
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（1）中所述pHT-43改造质粒通过将pHT-43质粒中的诱导型启动子替换为SEQ ID NO.1所示的P43启动子获得。
3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（1）中所述猪源干扰素基因为密码子优化后的猪源IFN-α干扰素基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（2）中所述枯草芽孢杆菌为wb800n枯草芽孢杆菌。
5.权利要求1-4任一项所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株在制备具有广谱抗病毒作用的生物制品中的应用。
6.权利要求1-4任一项所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株在制备具有免疫调节作用的生物制品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述生物制品为表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌口服液、表达重组干扰素的枯草芽孢杆
8.一种表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌冻干粉由如下方法制备而成：
...【技术特征摘要】
1.一种猪体内表达重组干扰素的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌肠道定植菌株由如下方法制备而成:
2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（1）中所述pht-43改造质粒通过将pht-43质粒中的诱导型启动子替换为seq id no.1所示的p43启动子获得。
3.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（1）中所述猪源干扰素基因为密码子优化后的猪源ifn-α干扰素基因，其核苷酸序列如seq id no.4所示。
4.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌肠道定植菌株，其特征在于，步骤（2）中所述枯草芽孢杆菌为wb800n枯草...
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