【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及噬菌体发酵，具体为多噬菌体联合发酵方法及应用。
技术介绍
1、噬菌体是一类感染细菌的病毒，专一性强，不对周围环境和益生菌产生有害影响，使用绿色安全，是目前抗生素替代产品中具有绿色、安全和有效等特点的生物活性物质，在动物养殖、科学研究、食品安全、以及公共卫生安全等方面得到较广泛的应用。目前噬菌体用于临床细菌感染常采用混合多种鸡尾酒的方式进行，以克服具有特定噬菌体抗性菌的繁殖扩增，并提高对致病细菌的裂解率和裂解范围，达到更好的预防或者治疗致病细菌感染的效果。
2、在实际生产过程中，鸡尾酒无疑增加了操作的复杂性和生产成本，因为常需要对每一个噬菌体进行单独发酵，然后在根据一定的比例混合。为简化实验操作，可以将不用的噬菌体在一个摇瓶或者发酵罐里发酵，以减少操作次数，但此种方法在实践中面临诸多问题，比如产生噬菌体效价低、噬菌体相互干扰、宿主菌裂解不彻底、噬菌体存在，且目前未见有按照这样的工艺进行生产的。
3、中国专利文献cn118006567a公开了一种采用不同种属宿主菌生产噬菌体的发酵方法及其应用，使用同时裂解大肠和沙门的噬菌体进行两种宿主接替混合培养的方式制备该株噬菌体，并没有起到增益噬菌体种类和增加噬菌体效价或裂解的能力。中国专利文献cn113444693a公开了一种噬菌体与益生菌的联合发酵工艺，采用发酵单个噬菌体与益生菌联合培养的方式来减少发酵液残留宿主菌并同时获得噬菌体和益生菌，但该专利技术未减少噬菌体鸡尾酒制备时因噬菌体单独发酵而产生的操作繁琐、成本较高的问题。
1、本专利技术提供了多噬菌体联合发酵方法及应用，通过多种不同种类的噬菌体进行联合发酵，提升单菌发酵的噬菌体效价，解决现有技术多次重复单独发酵操作繁琐、成本较高的缺陷。
2、有鉴于此，本专利技术的方案为：
3、多噬菌体联合发酵方法，步骤包括：
4、1)通过测定噬菌体裂解宿主谱，筛选噬菌体唯一对应特异性裂解的宿主菌，所述噬菌体包括大肠杆菌噬菌体及沙门氏菌噬菌体，任意一种噬菌体包含一个或多个，任意一种宿主菌包含一个或多个；
5、2)挑取步骤1)筛选得到的宿主菌接种至培养基进行培养，分步或同时接种两种宿主菌至培养瓶，接种噬菌体进行分步联合培养或一步联合培养发酵，发酵至噬菌体至所需效价，收集发酵液、离心，除菌过滤后保存。
6、进一步地，步骤2)中所述分布联合发酵过程为：先接种一种宿主菌至培养瓶，接种与其对应的噬菌体进行培养发酵；然后再接种另一种宿主菌至培养瓶，再接种与其对应的另一种噬菌体进行培养发酵。
7、进一步地，步骤2)中所述一步联合发酵过程为：同时接种两种宿主菌至培养瓶，再接种两种噬菌体进行培养发酵。
8、优选地，所述任意一种宿主菌均为两个，任意接种过程均同时进行；所述任意一种噬菌体均为两个，接种时同时进行。
9、优选地，所述发酵条件为：37℃，150rpm，通气量为1.5m3/h。
10、进一步地，步骤2)中所述宿主菌接种至培养瓶培养至od值为0.6-0.8时，接种噬菌体。
11、优选地，步骤2)中，所述任意噬菌体按最佳moi接种。
12、进一步地，步骤1)中，所述裂解谱的测定采用双层平板法。
13、本专利技术另一个目的在于，提出以上所述联合发酵方法在制备大肠杆菌噬菌体和/或沙门氏菌噬菌体中的应用。
14、与现有技术相比，本专利技术具备以下有益效果：
15、本专利技术所述多噬菌体联合发酵方法将不同种类噬菌体进行联合发酵，提升了单菌发酵的噬菌体效价，简化了噬菌体生产工艺流程，提高了效率。同时充分利用了培养基营养成分，一次发酵得到了多种产物，降低成本。
16、本专利技术所述多噬菌体联合发酵得到的产物为后续噬菌体鸡尾酒产品复配简化了流程，复配的鸡尾酒噬菌体种类更多，在实际应用中覆盖面更广，能裂解更多的致病菌，达到减抗替抗的目的。
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1.多噬菌体联合发酵方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中所述分布联合发酵过程为：先接种一种宿主菌至培养瓶，接种与其对应的噬菌体进行培养发酵；然后再接种另一种宿主菌至培养瓶，再接种与其对应的另一种噬菌体进行培养发酵。
3.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中所述一步联合发酵过程为：同时接种两种宿主菌至培养瓶，再接种两种噬菌体进行培养发酵。
4.根据权利要求2或3所述的联合发酵方法，其特征在于，所述任意一种宿主菌均为两个，任意接种过程均同时进行；所述任意一种噬菌体均为两个，接种时同时进行。
5.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，所述发酵条件为：37℃，150rpm，通气量为1.5m3/h。
6.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中所述宿主菌接种至培养瓶培养至OD值为0.6-0.8时，接种噬菌体。
7.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中，所述任意噬菌体按最佳MOI接种。
8.根
9.权利要求1-8任意一项所述联合发酵方法在制备大肠杆菌噬菌体和/或沙门氏菌噬菌体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.多噬菌体联合发酵方法，其特征在于，步骤包括：
2.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中所述分布联合发酵过程为：先接种一种宿主菌至培养瓶，接种与其对应的噬菌体进行培养发酵；然后再接种另一种宿主菌至培养瓶，再接种与其对应的另一种噬菌体进行培养发酵。
3.根据权利要求1所述的联合发酵方法，其特征在于，步骤2)中所述一步联合发酵过程为：同时接种两种宿主菌至培养瓶，再接种两种噬菌体进行培养发酵。
4.根据权利要求2或3所述的联合发酵方法，其特征在于，所述任意一种宿主菌均为两个，任意接种过程均同时进行；所述任意一种噬菌体均为两个，接种时同时...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨航，邵伟，储朝阳，刘杰，张晓妹，赵子荣，陈亚帆，周刚，
申请(专利权)人：湖北之微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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