【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及用于霍乱弧菌检测的crispr-cas12a引物组及其应用。
技术介绍
1、霍乱弧菌(burkholderia mallei)是一种革兰氏阴性菌，属于弧菌属，在虾、蟹、牡蛎等甲壳类及贝类水生动物中广泛存在，可引起烈性肠道传染病霍乱，发病急、传染性强且病死率高，曾在世界上引发多次大流行，是对人类危害极大的一种食源性致病菌。尽管现在水质、卫生以及霍乱临床治疗已经有所改善，但该疾病每年仍然会导致全球约10万人死亡。因此霍乱弧菌的快速、高效检测在公共卫生防疫方面具有极其重要的意义。
2、经典的霍乱弧菌检测方法，包括分离培养、pcr技术、全基因组和宏基因组测序等，这些方法虽然在检测霍乱弧菌方面起着重要作用，但同时具有费时费力、时间周期长且效率低、需要专业人员及昂贵仪器、假阳性率高、不适于临场快速检测等问题。因此，无论是预防还是治疗，都需要开发一种快速、灵敏和特异的方法来检测霍乱弧菌。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何准确快速检测霍乱弧菌和/或如何快速、高灵敏度高特异性检测霍乱弧菌。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于检测霍乱弧菌的试剂盒，所述试剂盒可为试剂盒a、试剂盒b或试剂盒c；
3、所述试剂盒a可含有ompw-3f/ompw-1r引物对、ctxa-2f/ctxa-1r引物对、probe、ompw-crrna10和ctxa-crrna3；所述ompw-3f/ompw-1r引物对由ompw-3
4、所述试剂盒b可含有ompw-3f/ompw-1r引物对、probe和ompw-crrna10；所述ompw-3f/ompw-1r引物对由ompw-3f引物和ompw-1r引物组成，所述ompw-3f引物为序列表中seqid no.5所示的单链dna分子，所述ompw-1r引物为序列表中seq id no.7所示的单链dna分子；所述probe为序列表中seq id no.42所示的单链dna分子，所述ompw-crrna10为序列表中seq id no.40所示的rna分子。
5、所述试剂盒c可含有ctxa-2f/ctxa-1r引物对、probe和ctxa-crrna3；所述ctxa-2f/ctxa-1r引物对由ctxa-2f引物和ctxa-1r引物组成，所述ctxa-2f引物为序列表中seqid no.12所示的单链dna分子，所述ctxa-1r引物为序列表中seq id no.15所示的单链dna分子；所述probe为序列表中seq id no.42所示的单链dna分子，所述ctxa-crrna3为序列表中seq id no.23所示的rna分子。
6、上文所述的试剂盒在，所述probe可在seq id no.42的第1位核苷酸上标记荧光基团、第12位核苷酸上标记淬灭基团bhq1。
7、上文所述试剂盒还可含有cas12a蛋白。
8、上文所述试剂盒还可包括含有核苷酸序列是seq id no.1的ompw基因序列的重组载体和/或核苷酸序列是seq id no.2的ctxa基因序列的重组载体。
9、上述试剂盒中，所述ompw-crrna10可由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列可为序列表中seq id no.40的第22-42位核苷酸；所述锚定序列可为序列表中seq idno.26的第1-21位核苷酸。所述ctxa-crrna3可由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列可为序列表中seq id no.23的第22-41位核苷酸；所述锚定序列可为序列表中seq idno.23的第1-21位核苷酸。
10、上文所述试剂盒中还可含有rna酶抑制剂。
11、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测霍乱弧菌的基因组dna的系统，所述系统可含有上文所述的试剂盒。
12、上述系统还可含有荧光检测系统。
13、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了组合物，所述组合物可为组合物a-1、组合物b-1或组合物c-1。
14、所述组合物a-1可含有上文所述ompw-3f/ompw-1r引物对、ctxa-2f/ctxa-1r引物对、probe、ompw-crrna10和ctxa-crrna3；
15、所述组合物b-1可含有上文所述ompw-3f/ompw-1r引物对、probe和ompw-crrna10；
16、所述组合物c-1可含有上文所述ctxa-2f/ctxa-1r引物对、probe和ctxa-crrna3。
17、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了上文所述组合物的下述任一中应用：
18、p1、在开发或制备检测或辅助检测霍乱弧菌或其核酸的产品中的应用；
19、p2、在开发或制备筛查或辅助筛查霍乱患者的产品中的应用；
20、p3、在开发或制备筛选或辅助筛选治疗霍乱弧菌的药物中的应用。
21、上文所述霍乱弧菌可为产毒型霍乱弧菌。上述产品可为区分非产毒型和产毒型霍乱弧菌的产品。
22、本专利技术涉及用于霍乱弧菌的crispr-cas12a检测特异性靶标序列、引物组及其应用，更加具体的涉及用于霍乱弧菌检测靶标序列和crispr-cas12a检测用引物、crrna及其用途。本专利技术的目的是提供一种用于霍乱弧菌核酸检测的特异性靶标序列以及靶向该序列的crispr检测引物和crrna，将此引物组及crrna用于基于crispr技术的基因检测中可快速现场检测霍乱弧菌，并可区分非产毒型和产毒型霍乱弧菌，具有特异性好，灵敏度高，简易的优点。
23、上文中检测霍乱弧菌的应用为非疾病诊断治疗性应用，上文中检测霍乱弧菌的方法为非疾病诊断治疗性方法；具体地，应用和方法目的是用于霍乱弧菌药物模型的制备或者用于筛选霍乱弧菌治疗药物。
24、本专利技术所提供的引物及crrna涉及医用检查检验仪器及服务中的体外诊断用试剂，是针对霍乱弧菌的特异性基因ompw和ctxa进行设计的，且利用crispr(clusteredregularly interspaced short palindromic repeats，成簇规律间本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于检测霍乱弧菌的试剂盒，所述试剂盒为试剂盒A、试剂盒B或试剂盒C；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Probe在SEQ ID No.42的第1位核苷酸上标记荧光基团、第12位核苷酸上标记淬灭基团BHQ1。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有Cas12a蛋白。
4.根据权利要求1、2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有核苷酸序列是SEQ ID No.1的ompw基因序列的重组载体和/或核苷酸序列是SEQ IDNo.2的ctxa基因序列的重组载体。
5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于：所述ompw-crRNA10由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列为序列表中SEQ ID No.40的第22-42位核苷酸；所述锚定序列为序列表中SEQ ID No.26的第1-21位核苷酸；所述ctxa-crRNA3由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列为序列表中SEQ ID No.23的第22-41位核苷酸；所述锚定序列为序列表中SEQ ID No.23的第1-
6.根据权利要求1-5中任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有RNA酶抑制剂。
7.检测霍乱弧菌的基因组DNA的系统，其特征在于：所述系统含有权利要求1-6中任一权利要求所述的试剂盒。
8.根据权利要求7所述的系统，其特征在于：所述系统还含有荧光检测系统。
9.组合物，其特征在于：所述组合物为组合物A-1、组合物B-1或组合物C-1；
10.权利要求9所述组合物的下述任一中应用：
...【技术特征摘要】
1.用于检测霍乱弧菌的试剂盒，所述试剂盒为试剂盒a、试剂盒b或试剂盒c；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述probe在seq id no.42的第1位核苷酸上标记荧光基团、第12位核苷酸上标记淬灭基团bhq1。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有cas12a蛋白。
4.根据权利要求1、2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有核苷酸序列是seq id no.1的ompw基因序列的重组载体和/或核苷酸序列是seq idno.2的ctxa基因序列的重组载体。
5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于：所述ompw-crrna10由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列为序列表中seq id no.40的第22-...
【专利技术属性】
技术研发人员：王俊虎，齐永，李越希，毛颖清，易海鸣，葛艺欣，王洪铭，杨展，陈琼，周东明，
申请(专利权)人：中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：
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