用于霍乱弧菌检测的CRISPR-Cas12a引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于霍乱弧菌的CRISPR‑Cas12a检测引物组及其应用。本发明专利技术提供了用于检测霍乱弧菌的CRISPR‑Cas12a系统，还提供了用于特异性扩增第一方面中所述霍乱弧菌靶点序列的RAA扩增引物；作为荧光报告分子的探针。本发明专利技术基于霍乱弧菌及其近缘物种的全基因组比对获取霍乱弧菌特异性基因序列，进一步利用特异性基因序列设计RAA扩增引物和crRNA序列对霍乱弧菌进行检测，并开发相关试剂盒。本发明专利技术可用于制备特异检测霍乱弧菌的试剂盒，将其与其他近缘物种区分，同时通过检测ompw基因和ctxa基因可用于制备区分产毒型霍乱弧菌和非产毒型霍乱弧菌的试剂盒；具有快速、简便、准确的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及用于霍乱弧菌检测的crispr-cas12a引物组及其应用。

技术介绍

1、霍乱弧菌(burkholderia mallei)是一种革兰氏阴性菌，属于弧菌属，在虾、蟹、牡蛎等甲壳类及贝类水生动物中广泛存在，可引起烈性肠道传染病霍乱，发病急、传染性强且病死率高，曾在世界上引发多次大流行，是对人类危害极大的一种食源性致病菌。尽管现在水质、卫生以及霍乱临床治疗已经有所改善，但该疾病每年仍然会导致全球约10万人死亡。因此霍乱弧菌的快速、高效检测在公共卫生防疫方面具有极其重要的意义。

2、经典的霍乱弧菌检测方法，包括分离培养、pcr技术、全基因组和宏基因组测序等，这些方法虽然在检测霍乱弧菌方面起着重要作用，但同时具有费时费力、时间周期长且效率低、需要专业人员及昂贵仪器、假阳性率高、不适于临场快速检测等问题。因此，无论是预防还是治疗，都需要开发一种快速、灵敏和特异的方法来检测霍乱弧菌。

技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题是如何准确快速检测霍乱弧菌和/或如何快速、高灵敏度本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于检测霍乱弧菌的试剂盒，所述试剂盒为试剂盒A、试剂盒B或试剂盒C；

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述Probe在SEQ ID No.42的第1位核苷酸上标记荧光基团、第12位核苷酸上标记淬灭基团BHQ1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有Cas12a蛋白。

4.根据权利要求1、2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有核苷酸序列是SEQ ID No.1的ompw基因序列的重组载体和/或核苷酸序列是SEQ IDNo.2的ctxa基因序列的重组载体。

5.根据权利要求1-4中任一权...

【技术特征摘要】

1.用于检测霍乱弧菌的试剂盒，所述试剂盒为试剂盒a、试剂盒b或试剂盒c；

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述probe在seq id no.42的第1位核苷酸上标记荧光基团、第12位核苷酸上标记淬灭基团bhq1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有cas12a蛋白。

4.根据权利要求1、2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括含有核苷酸序列是seq id no.1的ompw基因序列的重组载体和/或核苷酸序列是seq idno.2的ctxa基因序列的重组载体。

5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的试剂盒，其特征在于：所述ompw-crrna10由向导序列和锚定序列组成；所述向导序列为序列表中seq id no.40的第22-...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊虎，齐永，李越希，毛颖清，易海鸣，葛艺欣，王洪铭，杨展，陈琼，周东明，
申请(专利权)人：中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：