一种分泌PD-1单域抗体靶向CD105的CAR-T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种分泌PD‑1单域抗体靶向CD105的CAR‑T细胞及其制备方法和应用，所述CAR‑T细胞是嵌合抗原受体CD105Nb‑HIStag‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑PD‑1Nb修饰的T细胞，所述嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述CAR‑T细胞的制备方法包括：构建重组慢病毒载体，包装慢病毒、慢病毒感染T细胞，进行体外诱导、扩增培养以及获得工程化分泌PD‑1单域抗体靶向CD105的CAR‑T细胞，CD105‑PD‑1/Nb CAR‑T细胞在对CD105阳性肿瘤细胞具有较好的杀伤作用，CD105‑PD‑1/Nb CAR‑T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用与肿瘤相关细胞CD105的表达量有关，为肿瘤的过继性治疗提供了新策略。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肿瘤生物制品领域，涉及过继免疫治疗中的一种分泌pd-1单域抗体靶向cd105的car-t细胞(cd105-pd-1/nb car-t)及其制备方法和应用。

技术介绍

1、t细胞可以通过表达嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)靶向肿瘤细胞。通过将特异性识别肿瘤抗原的单链抗体与可活化t细胞的受体胞内结构域“免疫受体酪氨酸活化基序”用人工方法融合成重组基因，生成重组质粒，再在体外通过转染技术转染到患者的t细胞，使患者t细胞表达肿瘤抗原受体，这样的疗法称为car-t细胞疗法。car-t细胞疗法是当下肿瘤免疫治疗的最热门最有研究价值的治疗方法。目前car-t治疗在血液肿瘤中取得了很好的进展，但是由于实体肿瘤微环境复杂，car-t对实体瘤的杀伤效果有限，因此需要探索新的方法来提高car-t治疗实体肿瘤的活性。

2、car的基础设计中包括肿瘤相关抗原结合区、胞内信号区、跨膜区、胞外铰链区等。car-t目前已经发展到第四代，目前在血液肿瘤中取得了较好的进展，而对于实体瘤治疗，car-t细胞疗效一直不佳，其中重本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种分泌PD-1单域抗体靶向CD105的CAR-T细胞，其特征在于，所述CAR-T细胞是嵌合抗原受体CD105 Nb-HIStag-CD8-CD137-CD3ζ-PD-1Nb修饰的T细胞，所述嵌合抗原受体CD105 Nb-HIStag-CD8-CD137-CD3ζ-PD-1Nb的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的CAR-T细胞，其中所述嵌合抗原受体CD105Nb-HIStag-CD8-CD137-CD3ζ-PD-1Nb的核苷酸序列为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

3.一种如权利要求1所述的CAR-T细...

【技术特征摘要】

1.一种分泌pd-1单域抗体靶向cd105的car-t细胞，其特征在于，所述car-t细胞是嵌合抗原受体cd105 nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb修饰的t细胞，所述嵌合抗原受体cd105 nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb的核苷酸序列包含如seq id no.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的car-t细胞，其中所述嵌合抗原受体cd105nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-pd-1nb的核苷酸序列为如seq id no.1所示的核苷酸序列。

3.一种如权利要求1所述的car-t细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：设计car目的序列，通过pcr法获得cd105nb-histag-cd8-cd137-cd3ζ-2a-pd-1nb的car目的序列片段，将酶切后的慢病毒载体与pcr法得到的car目的序列重组，将重组后的慢病毒载体转化至大肠杆菌中，并且筛选阳性克隆菌，进行阳性克隆菌测序验证是否成功构建含有cd105/pd-1nb car序列的慢病毒载体，对测序成功的重组阳性克隆菌株提取质粒，转染待转染细胞后通过rt-pcr鉴定cd105/pd-1nb car序列细胞中表达情况，验证重组慢病...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢小玲，黄夏宁，于子航，刘诗权，谢深霞，孙树阳，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：