【技术实现步骤摘要】
本申请属于电磁生物学领域，更具体地，涉及一种对体外培养的卵母细胞施加电磁脉冲的方法。
技术介绍
1、探索女性生育力保存策略是目前生殖领域研究的热点和难点。一方面，生育力下降的女性患者的卵泡池耗竭，卵巢皮质中仅有极少量静息原始卵泡在体内无法自然生长发育，但未成熟卵母细胞在体外难以发育成熟，另一方面，对于年轻的女性肿瘤患者，在其放疗、化疗前将卵巢组织冷冻，解冻后获取未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，ivm)是保存生育力的首选方法。提高人类卵母细胞体外培养的成熟率及卵母细胞质量及后续胚胎发育潜能是提高辅助生殖结局成功率极为关键的一环。
2、卵泡是育龄女性生殖系统的核心功能单位，其发育的最终目的是产生一个可育的卵子，完成受精和胚胎发育的过程。现代社会由于环境因素、精神压力等导致原始卵泡池过早耗竭，从而导致卵巢功能过早衰退，引发卵巢储备功能下降、早发性卵巢功能不全、最终卵巢早衰，严重影响了女性的生殖能力。生育能力的衰退给女性群体带来了沉重的生理和心理负担，故维持卵泡的正常发育对女性生殖尤为重要。卵泡的发育是涉及多种细胞、多个阶段的复杂过程，其中颗粒细胞和卵母细胞是构成卵泡的重要细胞，卵泡的形成需要颗粒细胞与卵母细胞间密切的相互作用。卵母细胞与颗粒细胞通过一系列自分泌或旁分泌的方式调控着卵泡的正常发育。卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，ivm)是指从卵巢获取未成熟卵母细胞，进行体外培养，使其成熟并具备受精和支持胚胎发育至足月分娩的能力。ivm技术现阶段存在诸多问题，如体外培养
3、在现代科学当中，脉冲强磁场被列为科学实验的最为重要的极端条件之一。脉冲强磁场作为强磁场研究的重点和前沿现在越来越受到人们的重视。脉冲电磁场(pulsedelectromagnetic field，pemf)疗法具有一些潜在的优势，包括无创、安全，以及与其他可用疗法联合使用的可能性。pemf是由电流通过赫尔姆兹线圈所产生的具有脉冲间歇的磁场效应。pemf装置主要由三部分组成，第一部分为信号发生器，它能够产生具有特定波形和频率的电压信号；第二部分为信号扩大器，它能够产生供应电磁场发生器的电流输出，调节扩大器的输出可以改变场强的大小。第三部分为电磁场发生器，它主要由线圈组成。通过电容和电感的方式，pemf可无创地作用于生物系统。前者需要将相对电极放置在感兴趣组织周围，并且与皮肤直接接触，而后者则无需接触皮肤。脉冲电磁场作为一种无创的物理干预方式，最早用于骨不连和骨折延迟愈合的治疗。低频脉冲电磁场(low frequency pulsedelectromagnetic field，lf-pemf)作为低频电磁场的代表，是指频率为1～100hz，峰值磁场<10mt的低频、低强度磁场。经验证发现脉冲电磁场(pemf)疗法具有一些潜在的优势，包括无创、安全、对非癌细胞没有毒性，以及与其他可用疗法联合使用的可能性，近年来被越来越多地应用于神经系统疾病及肿瘤的治疗，包括皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、肝细胞癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、膀胱癌、甲状腺癌和结肠癌。低频率的脉冲强磁场可以选择性杀伤肿瘤组织和抑制肿瘤生长，对生物体的免疫系统功能起调节作用。然而其对生殖系统方面的影响目前尚不明确。
技术实现思路
1、那么能否利用电磁脉冲改善卵母细胞体外成熟发育能力进而移植到体内后能发挥较长时间的作用和良好的作用效果呢？通过本申请，我们期望通过电磁脉冲调控卵母细胞体外成熟发育能力，从而为临床上生育系统的研究提供参考。
2、为实现上述目的，本申请提供了一种对体外培养的卵母细胞施加电磁脉冲的方法，包括：对生发泡期的所述卵母细胞施加频率为1～100hz，强度为1～10mt，时间为5～20min的电磁脉冲。
3、优选的，所述体外培养的卵母细胞的培养密度为300～600个/ml。
4、优选的，所述电磁脉冲施加的次数为1～10次，施加的间隔为30～60ms。
5、优选的，所述卵母细胞为小鼠卵母细胞。
6、作为进一步优选的，所述小鼠的品系为c57系、icr系或km系。
7、作为进一步优选的，所述小鼠的周龄为8～40周。
8、作为进一步优选的，所述体外培养所用的培养基为m16培养基。
9、本申请的另一目的在于提供用上述方法施加过电磁脉冲的卵母细胞。
10、总体而言，通过本申请所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
11、1.本申请首次将脉冲磁场应用于卵母细胞，建立了卵母细胞成熟和发育能力改善的新方式，其能显著提高卵母细胞的成熟和发育能力，进而改善着卵泡的正常发育，总体上改善了卵巢储备功能下降的问题；此外，本申请使用电磁场这一物理疗法，是一种非侵入性技术，大大增加了其应用的安全性和有效性；
12、2.经验证，在经过磁场作用后，40周龄老龄小鼠的各方面指标都得到改善，例如受精率升高，线粒体膜电位升高，线粒体数量变多，异常形态纺锤体比例变低，活性氧减少，溶酶体囊泡密度变低；其中体外囊胚形成率和凋亡情况达到了接近8周龄小鼠的水平。
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1.一种对体外培养的卵母细胞施加电磁脉冲的方法，其特征在于，包括：对生发泡期的所述卵母细胞施加频率为1～100Hz，强度为1～10mT，时间为5～20min的电磁脉冲。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述体外培养的卵母细胞的培养密度为300～600个/ml。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电磁脉冲施加的次数为1～10次，施加的间隔为30～60ms。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述卵母细胞为小鼠卵母细胞。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述小鼠的品系为C57系、ICR系或KM系。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述小鼠的周龄为8～40周。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述体外培养所用的培养基为M16培养基。
8.一种用权利要求1-7中任意一项所述方法施加过电磁脉冲的卵母细胞。
【技术特征摘要】
1.一种对体外培养的卵母细胞施加电磁脉冲的方法，其特征在于，包括：对生发泡期的所述卵母细胞施加频率为1～100hz，强度为1～10mt，时间为5～20min的电磁脉冲。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述体外培养的卵母细胞的培养密度为300～600个/ml。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电磁脉冲施加的次数为1～10次，施加的间隔为30～60ms。
4.如...
【专利技术属性】
技术研发人员：相文佩，李可欣，枚巧娟，蔡斯滢，韩小涛，张玲，李怀标，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：
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