【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及干细胞，具体涉及一种诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化的方法。
技术介绍
1、神经干细胞是中枢神经系统中具有自我更新能力并且能够分化产生成熟脑细胞的多潜能细胞。1992年rynolds等从成年鼠脑纹状体中首次分离出了神经干细胞，可以在体外持续扩増且具有向神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞分化潜能的能力.其后在脊髓、小脑、嗅球、侧脑室、海马和纹状体实质内也分离出多潜能性质的干细胞，1998年erikson等证实成人脑同样存在神经干细胞。
2、干细胞体外分离扩增和分化技术的建立及干细胞在不同的胚层之间横向分化的实现，为中枢神经系统损伤、神经系统变性病或遗传性代谢疾病、神经退行性疾病、脑肿瘤及脑血管疾病等的治疗提供了新的策略。目前干细胞治疗作为一种全新的生物学治疗方法，其开发研究主要集中在以下几个方面:一是直接细胞移植进行细胞替代治疗和基因治疗的双重作用；二是通过对生长因子和细胞因子的研究，诱导内源性干细胞増殖分化，进行神经自我修复。
3、干细胞的临床应用还不成熟，目前迫切需要加深了解干细胞的生物学特性及解决体外培养干细胞保持其强大的增殖能力、诱导干细胞定向分化等问题，以及了解控制和影响神经干细胞向神经元细胞多样化转化途径的因素。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提出一种诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化的方法，方法简单，原料来源广，条件温和，能够诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化，能实现神经干细胞的诱导培养，具有广阔的应用前
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：
3、本专利技术提供一种诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化的方法，包括以下步骤：
4、s1.将人源ips细胞系接种于铺有基质胶的培养皿中，培养，每天换液，6-7天传代一次，传代4-6次获得传代细胞；
5、s2.将传代细胞接种于铺有基质胶的培养皿中进行培养，第0-3天铺设培养基1，第4-6天替换为培养基2，第7-10天替换为培养基3，第11天收集细胞，获得神经干细胞。
6、作为本专利技术的进一步改进，步骤s1中所述人源ips细胞系的接种量为2-3×104细胞/cm2。
7、作为本专利技术的进一步改进，步骤s1中所述培养的条件为36-38℃，5％co2细胞培养箱。
8、作为本专利技术的进一步改进，步骤s1中培养基为mtesrtm1干细胞完全培养基。
9、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述传代细胞的接种量为1-2×106细胞/cm2。
10、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述培养基1为含有1-2wt％白藜芦醇的mtesrtm1干细胞完全培养基。
11、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述培养基2为含有1-2wt％白藜芦醇和1.5-2.5wt％人参皂苷rg3的mtesrtm1干细胞完全培养基。
12、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述培养基3为含有1-2wt％白藜芦醇、0.2-0.4wt％dha和1.5-2.5wt％人参皂苷rg3的mtesrtm1干细胞完全培养基。
13、作为本专利技术的进一步改进，步骤s2中所述培养的条件为36-38℃，5％co2细胞培养箱。
14、本专利技术具有如下有益效果：
15、本专利技术采用多级培养基进行培养，分别在第一阶段采用白藜芦醇进行抗氧化诱导，第二阶段采用人参皂苷rg3和白藜芦醇协同诱导，人参皂苷rg3是二醇类人参皂苷，属于稀有皂苷，对很多神经系统疾病如帕金森病、阿尔茨海默病、脑卒中等都具有神经保护和修复作用。第三阶段采用dha、人参皂苷rg3和白藜芦醇协同诱导，dha是大脑细胞膜的重要构成成分，参与脑细胞的形成和发育，对神经细胞轴突的延伸和新突起的形成有重要作用，多者协同作用，能明显提高诱导分化效率，分化率接近99％。
16、本专利技术方法简单，原料来源广，条件温和，能够诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化，能实现神经干细胞的诱导培养，具有广阔的应用前景。
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1.一种诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述人源iPS细胞系的接种量为2-3×104细胞/cm2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述培养的条件为36-38℃，5％CO2细胞培养箱。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中培养基为mTeSRTM1干细胞完全培养基。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述传代细胞的接种量为1-2×106细胞/cm2。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基1为含有1-2wt％白藜芦醇的mTeSRTM1干细胞完全培养基。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基2为含有1-2wt％白藜芦醇和1.5-2.5wt％人参皂苷Rg3的mTeSRTM1干细胞完全培养基。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述培养基3为含有1-2wt％白藜芦醇、0.2-0.4wt％DH
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述培养的条件为36-38℃，5％CO2细胞培养箱。
...【技术特征摘要】
1.一种诱导ips多能干细胞向神经干细胞定向分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中所述人源ips细胞系的接种量为2-3×104细胞/cm2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中所述培养的条件为36-38℃，5％co2细胞培养箱。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中培养基为mtesrtm1干细胞完全培养基。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中所述传代细胞的接种量为1-2×106细胞/cm2。
6.根据权利要求1所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁信燊，陈祥，
申请(专利权)人：广东龄值生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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