一种体外转录缓冲液、转录反应体系及应用制造技术

本申请涉及DNA转录技术领域，具体涉及一种体外转录缓冲液、转录反应体系及应用。一种体外转录缓冲液，包括以下浓度的组分：三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐200mM，氯化钠125mM，亚精胺10mM，氯化镁80‑120mM，聚（2‑二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯20‑40mM。本申请通过聚（2‑二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯和氯化镁的协同作用，聚（2‑二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯能有效提高DNA和RNA在转录体系中的稳定性和溶解度，氯化镁能够提高RNA聚合酶的结合效率，降低聚（2‑二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯与DNA结合后对转录效率的影响。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及dna转录，具体涉及一种体外转录缓冲液、转录反应体系及应用。

技术介绍

1、作为一种携带遗传信息、可直接决定蛋白翻译的物质，mrna在1961年被首次发现后便一直备受科学家的关注。20世纪90年代，科学家们开展了一系列关于mrna体外转录的临床前研究，以进一步探索其在疾病治疗领域的应用。

2、体外合成mrna主要是以cdna为模板通过体外反转录得到，最常用的是以质粒dna为模板利用rna聚合酶转录合成。目前，主要是采用含rna聚合酶的rna体外转录试剂盒来获得体外合成的mrna，它利用线性化的质粒dna为模板在含有rna聚合酶(t7，t3或sp6)的条件下，以ntp为底物，从启动子下游开始合成与模板dna中一条链互补的mrna，简单快速获得大量的mrna分子。

3、由于环境中时刻存在的rna酶，在长时间的实验过程中，总有少量的rna酶混入到整个转录体系中，从而影响最终生成的mrna。

技术实现思路

1、为了解决环境中的rna酶影响最终生成的mrna，本申请提供一种体外转录缓冲本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种体外转录缓冲液，其特征在于，包括以下浓度的组分：

2.根据权利要求1所述的体外转录缓冲液，其特征在于：所述聚（2-二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯与氯化镁的浓度比为1:3-4。

3.一种转录反应体系，其特征在于：包括如权利要求1或2所述的体外转录缓冲液。

4.根据权利要求3所述的转录反应体系，其特征在于：还包括如下浓度的组分：帽子类似物6.75mM，ATP 6.75mM，N1-Me-pUTP 6.75mM，CTP 6.75mM，GTP 6.75mM，质粒 0.05mg/mL，T7 RNA聚合酶15-30U/μL。

5.根据权利要求4所述的转...

【技术特征摘要】

1.一种体外转录缓冲液，其特征在于，包括以下浓度的组分：

2.根据权利要求1所述的体外转录缓冲液，其特征在于：所述聚（2-二甲氨基）甲基丙烯酸乙酯与氯化镁的浓度比为1:3-4。

3.一种转录反应体系，其特征在于：包括如权利要求1或2所述的体外转录缓冲液。

4.根据权利要求3所述的转录反应体系，其特征在于：还包括如下浓度的组分：帽子类似物6.75mm，atp 6.75mm，n1-me-putp 6.75mm，ctp 6.75mm，gtp 6.75mm，质粒 0.05mg/ml，t7 rna聚合酶15-30u/μl。

5.根据权利要求4所述的转录反应体系，...

【专利技术属性】
技术研发人员：于娜，罗诚，倪成章，
申请(专利权)人：艾美荣誉宁波生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：