一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法技术

本发明专利技术涉及生物技术技术领域，公开了一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法，包括利用位点指引的突变形成技术构建NleC突变体，包装病毒感染细胞，并与野生型NleC比较突变掉赖氨酸后对蛋白稳定性的提升作用。本发明专利技术通过对HA‑NleC的序列进行分析，使用位点指引的突变形成技术将NleC上的K102、K109和K123中的任意一个赖氨酸突变为精氨酸的突变体，并分别包装病毒感染细胞，多西环素诱导表达结果发现与野生型NleC比较，突变掉赖氨酸后对蛋白稳定性有明显的提升作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体来说，涉及一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法。

技术介绍

1、费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(ph+-all)是恶性程度最高的白血病类型之一，虽有伊马替尼、达沙替尼等针对其直接致病基因bcr-abl1的靶向药物，但控制效果远逊于慢性粒细胞性白血病。靶向药物合用泛素-蛋白酶体抑制剂在临床试验中对ph+-all特别是难治病例展示出一定疗效，但一来硼替佐米为代表的泛素蛋白酶体抑制剂毒性较大，二来泛素蛋白酶体抑制剂的耐药问题也不容乐观。泛素蛋白酶体抑制剂抗肿瘤的关键机制之一是抑制iκb泛素化降解从而抑制nf-κb的核转位。鉴于此，探索新的不依赖泛素蛋白酶体的抗nf-κb新手段联合靶向药有望为ph+-all的治疗带来全新策略。

2、nlec是由肠致病性和肠出血性大肠杆菌(epec和ehec)通过一种称为iii型分泌系统(t3ss)的针状蛋白复合物注射到受感染宿主细胞中的毒力因子之一。nlec特异性切割nf-κb在p65-p50异二聚体复合体中的p65亚基，阻断nf-κb信号通路，从而抑制宿主的炎症反应本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，该方法包括：

2.根据权利要求1所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，所述野生型NleC的体外构建包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，酶切过夜的温度为37℃。

4.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强NleC蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，T4连接酶连接ECORI/BamHI酶切纯化后的Plvx-Tetone-Puro载体的体系为：...

【技术特征摘要】

1.一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，该方法包括：

2.根据权利要求1所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，所述野生型nlec的体外构建包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，酶切过夜的温度为37℃。

4.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，t4连接酶连接ecori/bamhi酶切纯化后的plvx-tetone-puro载体的体系为：

5.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优化方法，其特征在于，室温放置时间为30min-60min。

6.根据权利要求2所述的一种利用位点指引的突变形成技术增强nlec蛋白稳定性的优...

【专利技术属性】
技术研发人员：席静静，陈翀，曹旭，李振宇，王聪月，陈茜燏，郁文杰，展佳敏，于傲洋，吴思涵，王艳霞，曹江，王晨，徐开林，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：