【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种双通道免疫试纸条制备方法。
技术介绍
1、免疫试纸条是一种典型的检测方法，广泛应用于现场和快速检测。现有的胶体金试纸条无需专业设备，但灵敏度较低，且无法定量检测；荧光试剂条虽然解决了这些问题，但需要专业设备进行样本检测。本专利技术结合胶体金和荧光颗粒的优势，对试纸条的结合垫进行处理，避免了阴性样品的设备测试分析问题，并且具有高灵敏度和定量测试的潜力。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种双通道免疫试纸条制备方法，具有设备利用率高、灵敏度高、定量测试潜力大等优点。
2、为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、一种双通道免疫试纸条制备方法，包括如下步骤：
4、s1：采用捕获抗体包被胶体金；
5、s2：采用捕获抗体包被荧光颗粒；
6、s3：采用鸡igy包被胶体金；
7、s4：采用鸡igy包被荧光颗粒；
8、s5：处理样品垫和结合垫；
9、s6：喷涂溶液到结合垫；
10、s7：制备检测线；
11、s8：制备质控线；
12、s9：组装；
13、s10：检测生物标志物。
14、进一步地，s1具体为：
15、向1ml胶体金溶液中加入12ul浓度为0.2mol/l的碳酸钾水溶液。然后加入40ug的il6捕获抗体，室温静置30min。接着，加入100ul 10wt％牛血清蛋白的tr
16、进一步地，s2具体为：
17、向1ml的mes缓冲液中加入0.05ml的表面羧基修饰的荧光颗粒分散液，超声混匀，在20000g下离心10min。去除上清液后，加入1ml的mes缓冲液，超声混匀，20000g下离心10min。去除上清液后，加入1ml的mes缓冲液，超声混匀，接着加入10ul edc的mes缓冲液，涡漩混匀，再加入10ul nhs的mes缓冲液，涡漩混匀,置于摇床，37℃避光活化15-30min，在20000g下离心10min。去除上清液后，采用1.5ml的mes缓冲液离心清洗2次。向清洗后的荧光颗粒中加入0.75ml的mes缓冲液，然后加入0.25ml浓度为0.2mg/ml的il6捕获抗体mes缓冲液。置于摇床，37℃避光反应2h。接着加入0.5ml的硼酸盐缓冲液。置于摇床，37℃避光反应1h。采用1.5ml含有0.05wt％吐温-20、1wt％牛血清蛋白和0.03wt％proclin 300的tris-盐酸缓冲液离心洗涤3次，离心速度和时间分别为2000g和10min。离心洗涤后加入0.5ml含有10mg牛血清蛋白、0.25mg聚乙烯吡咯烷酮、0.25mg聚乙二醇、5ul的吐温-20、20ul的酪蛋白水溶液、25g的海藻糖和15mg叠氮化钠的tris-盐酸缓冲液进行4℃储存待用。
18、进一步地，s3具体为：
19、向1ml胶体金溶液中加入12ul浓度为0.2mol/l的碳酸钾水溶液。然后加入40ug的鸡igy，室温静置30min。接着，加入100ul 10wt％牛血清蛋白的tris-盐酸缓冲液，室温静置30min。最后，12000rpm离心10min，收集沉淀，加入1ml的含有10mg牛血清蛋白、0.25mg聚乙烯吡咯烷酮、0.25mg聚乙二醇、5ul的吐温-20、20ul的酪蛋白水溶液、25g的海藻糖和15mg叠氮化钠的tris-盐酸缓冲液进行4℃储存待用。
20、进一步地，s4具体为：
21、向1ml的mes缓冲液中加入0.05ml的表面羧基修饰的荧光颗粒分散液，超声混匀，在20000g下离心10min。去除上清液后，加入1ml的mes缓冲液，超声混匀，20000g下离心10min。去除上清液后，加入1ml的mes缓冲液，超声混匀，接着加入10ul edc的mes缓冲液，涡漩混匀，再加入10ul nhs的mes缓冲液，涡漩混匀,置于摇床，37℃避光活化15-30min，在20000g下离心10min。去除上清液后，采用1.5ml的mes缓冲液离心清洗2次。向清洗后的荧光颗粒中加入0.75ml的mes缓冲液，然后加入0.25ml浓度为0.2mg/ml的鸡igy的mes缓冲液。置于摇床，37℃避光反应2h。接着加入0.5ml的含有1wt％牛血清蛋白和0.24wt％乙醇胺的硼酸盐缓冲液。置于摇床，37℃避光反应1h。采用1.5ml含有0.05wt％吐温-20、1wt％牛血清蛋白和0.03wt％proclin 300的tris-盐酸缓冲液离心洗涤3次，离心速度和时间分别为20000g和10min。离心洗涤后加入0.5ml含有10mg牛血清蛋白、0.25mg聚乙烯吡咯烷酮、0.25mg聚乙二醇、5ul的吐温-20、20ul的酪蛋白水溶液、25g的海藻糖和15mg叠氮化钠的tris-盐酸缓冲液进行4℃储存待用。
22、进一步地，s5具体为：
23、采用200ml含有3g羧甲基纤维素二钾、2g牛血清蛋白、1ml的吐温-20和10g蔗糖的tris-盐酸缓冲液浸泡样品垫。同时采用200ml含有0.2g聚乙烯吡咯烷酮、2g牛血清蛋白、1ml的吐温-20和10g蔗糖的tris-盐酸缓冲液浸泡结合垫。之后将二者置于真空烘箱37℃干燥2h。
24、进一步地，s6具体为：
25、采用划膜喷金仪以4ul/cm的速度将体积比例为5:5:1:1的胶体金包被il6的捕获抗体、荧光颗粒包被il6的捕获抗体、胶体金包被鸡igy和荧光颗粒包被igy的混合溶液喷涂到处理后的结合垫上，置于真空烘箱37℃干燥2h。
26、进一步地，s7具体为：
27、采用划膜喷金仪以1ul/cm的速度将1mg/ml的il6检测抗体溶液划线到硝酸纤维素膜上。
28、进一步地，s8具体为：
29、采用划膜喷金仪以1ul/cm的速度将1mg/ml的羊抗鸡igy二抗溶液划线到硝酸纤维素膜上。
30、进一步地，s9具体为：
31、将硝酸纤维素膜粘贴在聚偏氟乙烯板上；结合垫右侧粘贴在硝酸纤维素膜左侧上方，结合垫左侧粘贴在聚偏氟乙烯板上表面，其中，结合垫右侧覆盖硝酸纤维素膜1mm；
32、吸水垫左侧粘贴在硝酸纤维素膜右侧的上方，吸水垫右侧粘贴在聚偏氟乙烯板上表面，其中，吸水垫左侧覆盖硝酸纤维素膜2mm；
33、样品垫右侧粘贴在结合垫左侧的上方，样品垫左侧粘贴在聚偏氟乙烯板上表面，其中，样品垫右侧覆盖结合垫2mm；
34、之后用切条机将其切成一定宽度；然后装壳。
35、进本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双通道免疫试纸条制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种双通道免疫试纸条制备方...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红星，王海龙，唐继博，何小波，
申请(专利权)人：河南省科学院物理研究所，
类型：发明
国别省市：
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