【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与纤维蛋白结合的抗体、含有该抗体的纤维蛋白溶解性蛋白质和含有该蛋白质的药物制剂。本专利技术特别涉及适合于大量纯化的纤维蛋白溶解性蛋白质和含有该蛋白质的药物制剂。本专利技术另外涉及使纤维蛋白溶解性蛋白质稳定化的方法和经稳定化的纤维蛋白溶解性蛋白质的制造方法。
技术介绍
1、已开发出以比对纤维蛋白原更强的亲和性对纤维蛋白结合的抗体(专利文献1和2)。这些专利文献中公开了将该抗体用于癌症的治疗。对纤维蛋白强力结合的抗体也可以用于体内成像(专利文献1和2)。
2、另外，开发出对纤维蛋白结合的抗体和尿激酶原突变体的融合蛋白，并公开了具有血栓溶解作用(专利文献3)。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1：wo2014/133093
6、专利文献2：wo2018/203517
7、专利文献3：wo2021/200922
技术实现思路
1、本专利技术提供与纤维蛋白结合的抗体、含有该抗体的纤维蛋白溶解性蛋白质和含有该蛋白质的药物制剂。具体而言，明确了wo2021/200922(专利文献3)中大量制造上的问题(例如，蛋白质产生细胞中的生成量增加产生上限的问题、产生生成蛋白质的分解物的问题、培养中需要血清的问题、纯化中需要特定添加物的问题和意外活化的问题等)的本专利技术在一个方式中可减轻或解决上述问题中的任意一个以上。另外，专利文献3中公开的融合蛋白不与小鼠尿激酶受体结合、但是对人尿激酶受体显示反应性。本专利
2、根据本专利技术，提供以下专利技术。
3、[1]一种融合蛋白，其含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域，上述抗体或其抗原结合性片段与上述尿激酶原的催化结构域直接或借助接头而连接，所述融合蛋白中，
4、上述抗体或抗原结合性片段含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体的重链可变区和轻链可变区，
5、与序列号6或7记载的尿激酶原的第157位的苯丙氨酸对应的上述催化结构域的苯丙氨酸被置换为其它氨基酸。
6、[2]根据上述[1]所述的融合蛋白，其中，上述苯丙氨酸被置换为异亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或半胱氨酸。
7、[3]根据上述[1]或[2]所述的融合蛋白，其中，上述苯丙氨酸被置换为谷氨酸或天冬氨酸。
8、[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的融合蛋白，其中，与具有序列号1记载的氨基酸序列的融合蛋白相比，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体的结合能力降低。
9、[5]根据上述[1]～[4]中任一项所述的融合蛋白，其中，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体不显示显著的结合。
10、[6]根据上述[1]～[3]中任一项所述的融合蛋白，其中，在上述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的egf样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺、第27位的天冬酰胺、第29位的组氨酸、第30位的色氨酸和第40位的谷氨酰胺分别对应的上述egf样结构域的氨基酸被置换为其它氨基酸，对人尿激酶受体的结合能力降低或丧失。
11、[7]根据上述[1]～[4]中任一项所述的融合蛋白，其中，在上述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的egf样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺、第27位的天冬酰胺、第29位的组氨酸、第30位的色氨酸和第40位的谷氨酰胺分别对应的上述egf样结构域的氨基酸分别被置换为酪氨酸、丝氨酸、精氨酸、精氨酸和谷氨酸，对人尿激酶受体的结合能力降低或丧失。
12、[8]根据上述[1]～[4]中任一项所述的融合蛋白，其中，在上述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的egf样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺起直至第28位的异亮氨酸为止的氨基酸对应的上述egf样结构域的氨基酸缺失。
13、[9]一种药物制剂，其含有上述[1]～[8]中任一项所述的融合蛋白。
14、[10]一种制造上述[1]～[8]中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括下述步骤：培养以能够表达的方式具有编码上述融合蛋白的核酸的蛋白质产生细胞，使其表达融合蛋白；以及从得到的培养物中纯化上述融合蛋白。
15、[11]根据上述[10]所述的方法，其中，上述培养在无血清条件下或5%以下的血清存在下进行。
16、[12]根据上述[10]或[11]所述的方法，其中，纯化在l-精氨酸不存在下进行。
17、[13]一种制造(优选稳定性优良的)融合蛋白改造体或含有该改造体的药物组合物的方法，其中，
18、融合蛋白为含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域、并且上述抗体或其抗原结合性片段与上述尿激酶原的催化结构域直接或借助接头而连接的融合蛋白，
19、上述抗体或抗原结合性片段含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体的重链可变区和轻链可变区，
20、所述方法包括如下步骤：向上述融合蛋白导入f157e或f157d突变，由此赋予比上述改造前的融合蛋白优良的稳定性。
21、[21]一种融合蛋白，其含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域，上述抗体或其抗原结合性片段与上述尿激酶原的催化结构域直接或借助接头而连接，所述融合蛋白中，
22、上述抗体或抗原结合性片段含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体的重链可变区和轻链可变区，
23、在上述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的egf样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺、第27位的天冬酰胺、第29位的组氨酸、第30位的色氨酸和第40位的谷氨酰胺分别对应的上述egf样结构域的氨基酸被置换为其它氨基酸，对人尿激酶受体的结合能力降低或丧失。
24、[22]一种融合蛋白，其含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域，上述抗体或其抗原结合性片段与上述尿本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域，所述抗体或其抗原结合性片段与所述尿激酶原的催化结构域直接或借助接头而连接，所述融合蛋白中，
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述苯丙氨酸被置换为异亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或半胱氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述苯丙氨酸被置换为谷氨酸或天冬氨酸。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的融合蛋白，其中，与具有序列号1记载的氨基酸序列的融合蛋白相比，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体的结合能力降低。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的融合蛋白，其中，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体不显示显著的结合。
6.根据权利要求1～3中任一项所述的融合蛋白，其中，在所述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43
7.根据权利要求1～4中任一项所述的融合蛋白，其中，在所述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的EGF样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺、第27位的天冬酰胺、第29位的组氨酸、第30位的色氨酸和第40位的谷氨酰胺分别对应的所述EGF样结构域的氨基酸分别被置换为酪氨酸、丝氨酸、精氨酸、精氨酸和谷氨酸，对人尿激酶受体的结合能力降低或丧失。
8.根据权利要求1～4中任一项所述的融合蛋白，其中，在所述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的EGF样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺起直至第28位的异亮氨酸为止的氨基酸对应的所述EGF样结构域的氨基酸缺失。
9.一种药物制剂，其含有权利要求1～8中任一项所述的融合蛋白。
10.一种制造权利要求1～8中任一项所述的融合蛋白的方法，其包括下述步骤：
11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述培养在无血清条件下或5%以下的血清存在下进行。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，纯化在L-精氨酸不存在下进行。
13.一种制造稳定性优良的融合蛋白改造体或含有该改造体的药物组合物的方法，其中，
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，其含有与不溶性纤维蛋白结合的抗体或其抗原结合性片段以及具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第156位至第411位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的尿激酶原的催化结构域，所述抗体或其抗原结合性片段与所述尿激酶原的催化结构域直接或借助接头而连接，所述融合蛋白中，
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述苯丙氨酸被置换为异亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或半胱氨酸。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述苯丙氨酸被置换为谷氨酸或天冬氨酸。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的融合蛋白，其中，与具有序列号1记载的氨基酸序列的融合蛋白相比，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体的结合能力降低。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的融合蛋白，其中，对选自由人尿激酶受体和小鼠尿激酶受体组成的组中的1种以上尿激酶受体不显示显著的结合。
6.根据权利要求1～3中任一项所述的融合蛋白，其中，在所述抗体或其抗原结合性片段部分与催化结构域部分之间还含有具有与序列号6或7记载的尿激酶原的第7位至第43位的氨基酸序列对应的氨基酸序列的egf样结构域，与序列号6或7记载的尿激酶原的第22位的天冬酰胺、第27位的天冬酰胺、第29位的组氨酸、第30位的色氨酸和第40位的谷氨酰胺分别对应的所述egf样结构域的氨基酸被置换为其它氨基酸，对人尿激酶受体的结合能力降低或丧失。<...
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