一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用，属于基因型鉴别技术领域。本发明专利技术提供的鉴别中国甜柿基因型的方法，通过探针与目标分子之间发生特异性的水解反应方可生成荧光信号，误差更小，鉴别结果更准确，结果稳定性更高；只需要两个参考基因组，鉴定易操作，可以大幅降低中国甜柿基因型鉴别的工作量，试剂耗材等的消耗更少，鉴别成本更低；可以大幅缩短鉴别所需时间，提高鉴别效率，对中国甜柿基因型的鉴定可以为杂交亲本的选择提供参考，还可用于幼株的胚拯救、绿木嫁接和杂交组合的标记辅助选择，大幅提高PCNA育种效率，对育成具知识产权的完全甜柿新品种、甜柿品种改良具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因型鉴定，尤其是涉及一种鉴别中国甜柿基因型的方法及其应用。

技术介绍

1、柿(diospyros kaki thunb.，2n＝6x＝90；少数品种2n＝9x＝135)原产我国，是柿属植物中作为果树栽培的代表种，其传统产区在中国、韩国和日本等东亚地区。根据成熟期果实能否自然脱涩及其性状遗传特点，柿品种分为甜涩性状表现质量性状遗传的完全甜柿(pollination-constant and non-astringent,pcna)和数量性状遗传的非完全甜柿(non-pcna)。柿果实在其特化的果肉细胞—“单宁细胞”的液胞内积累大量的柿单宁(persimmontannin或kaki tannin)，也称“原花色素”(proanthocyanidins，简称“pas”)，其平均分子量为14,000da，是普通植物单宁的3-5倍。根据其在醇溶液中溶解性的不同可分为可溶性和不溶性单宁两类，可溶性单宁与口腔唾液蛋白结合后产生强烈的收敛和干燥的感觉(俗称“涩感”)，完全甜柿成熟时可在树上自然脱涩，不需脱涩处理即可脆食；非完全甜柿则在成熟后仍需经人工脱涩处本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鉴定中国甜柿基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种鉴定中国甜柿基因型的方法，其特征在于：所述S1中中国甜柿标准样品为‘小果甜柿’，参考基因为DkAct、L5R；中国甜柿自然脱涩位点CPCNA区间特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，Taqman特异探针的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于：所述S1中DkAct基因的特异性引物的上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物序列如SEQ IDNO.5所...

【技术特征摘要】

1.一种鉴定中国甜柿基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种鉴定中国甜柿基因型的方法，其特征在于：所述s1中中国甜柿标准样品为‘小果甜柿’，参考基因为dkact、l5r；中国甜柿自然脱涩位点cpcna区间特异性引物的上游引物序列如seq id no.1所示，下游引物序列如seq id no.2所示，taqman特异探针的序列如seq id no.3所示。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于：所述s1中dkact基因的特异性引物的上游引物序列如seq id no.4所示，下游引物序列如seq idno.5所示，taqman特异探针序列如seq id no.6所示；l5r基因的特异性引物的上游序列如seq id no.7所示，下游引物序列如seq id no.8所示，taqman特异探针序列如seq id no.9所示。

4.根据权利要求2所述的一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于：所述s2中基因组dna倍比稀释成不同的浓度指：最大浓度为120ng·μl-1，依次进行两倍稀释，共设置八个dna浓度梯度；s3中建立的标准曲线包括中国甜柿自然脱涩位点cpcna区间和参考基因的标准曲线。

5.根据权利要求1所述的一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于，所述s4中计算待测柿材料基因型，采用以下公式进行：

6.根据权利要求5所述的一种鉴别中国甜柿基因型的方法，其特征在于：当cpcna相对等位基因剂量小于0.5时，待测柿材料的基因型为bbbbbb；当cpcna相对等位基因剂量大于等于0.5小于1.5时，待测柿材料的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文兴，马渝婷，游文娟，余思睿，罗正荣，张青林，徐莉清，郭大勇，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：