一种体外检测精子存活率的方法技术

本发明专利技术公开了一种体外检测精子存活率的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：（ａ）将精子悬浮液和膜通透性的核染料混合得到待测样品１；所述的膜通透性的核染料选自Ｔｒａｎｓｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯ或ＳＹＢＲ；（ｂ）用荧光酶标仪检测待测样品１，得到第１次样品检测荧光强度；（ｃ）将待测样品１和碘化丙啶（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ？ｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）混合得到待测样品２；（ｄ）用荧光酶标仪检测待测样品２，得到第２次样品检测荧光强度；和（ｅ）得到存活系数越大，精子存活率越大。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及一种体外检测精子存活量的方法，换言之是一种检测精子质膜损伤情况的新方法。
技术介绍
目前，评价精子质膜完整性的主要方法有常规染色法、低渗膨胀试验 (hypoosmotic swelling test, HOST)和荧光分子探针染色法。常规染色法至今还是国内 临床男科实验室的常用方法，主要有伊红染色、伊红-苯胺黑(eosin-nigrosin stain)、台 盼蓝(typan blue stain)染色以及伊红_苯胺黑_吉姆萨染色法等。这些方法操作要复 杂，而且高估了死精子的比例，更重要的是不同的实验室之间，检测结果差异较大。 低渗膨胀试验由Jeyendran等于1984年报道，当精子处于低渗溶液中时，质膜外 的水分子进入精子以达到细胞内外的渗透压平衡，这时精子尾部发生膨胀弯曲，说明精子 质膜是完整的。这种方法廉价简单，但是准确性低，主观性强，只能用于粗略评价精子质膜 完整性。 近年来利用能区分死活精子及非细胞成分的荧光探针染色方法，不仅具有简便、 快速且准确的特点，而且一些荧光探针在一定时间内对细胞没有损伤作用，对精子的活率 没有明显影响，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外检测精子存活率的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：（ａ）将精子悬浮液和膜通透性的核染料混合得到待测样品１；所述的膜通透性的核染料选自Ｔｒａｎｓｇｒｅｅｎ、ＳＹＴＯ或ＳＹＢＲ；（ｂ）用荧光酶标仪检测待测样品１，得到第１次样品检测荧光强度；（ｃ）将待测样品１和碘化丙啶（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ，ＰＩ）混合得到待测样品２；（ｄ）用荧光酶标仪检测待测样品２，得到第２次样品检测荧光强度；和（ｅ）得到存活系数＝第２次样品检测荧光强度／第１次样品检测荧光强度，存活系数越大，精子存活量越大。

【技术特征摘要】
一种体外检测精子存活率的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤(a)将精子悬浮液和膜通透性的核染料混合得到待测样品1；所述的膜通透性的核染料选自Transgreen、SYTO或SYBR；(b)用荧光酶标仪检测待测样品1，得到第1次样品检测荧光强度；(c)将待测样品1和碘化丙啶(propidium iodide，PI)混合得到待测样品2；(d)用荧光酶标仪检测待测样品2，得到第2次样品检测荧光强度；和(e)存活系数越大，精子存活量越大。F2008102076601C0000011.tif2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤(a) 将精子悬浮液和精子培养液分别同膜通透性的核染料混合得到待测样品l和对照 样品1 ;所述的膜通透性的核染料选自Transgreen、SYTO或SYBR;所述的精子培养液选自 HTF (Human Tubal Fluid人输卵管液)、B丽培养液、或M16培养液；(b) 用荧光酶标仪分别检测待测样品1和对照样品l，得到第1次样品检测荧光强度和 第1次对照检测荧光强度；(c) 将待测样品l和对照样品l分别同碘化丙啶(propidium iodide,PI)混合得到待 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：施惠娟，赵洪鑫，贾晓峰，袁瑶，史庭燕，刁华，林菊芳，宋丽伟，时伟丽，徐彦，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]