一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法技术

本发明专利技术公开了一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，将大鼠随机分为空白对照组，阳性对照15mg/kg万艾可组和赶黄草三个剂量组0.5g生药/kg、1.0g生药/kg、2.0g生药/kg，连续灌胃14d，进行试验，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。本发明专利技术研究结果提示万艾可能提高雄性大鼠的交配能力，但三个剂量赶黄草连续灌胃28天，动物行为活动如常，一般情况良好。实验各组动物交配能力、性器官指数、阴茎勃起功能、精子存活率等无明显促进或抑制作用，与空白对照组比较未见明显差异。因此，赶黄草对雄性大鼠正常性功能无明显影响，长期应用安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于动物实验领域，尤其涉及一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法。
技术介绍
赶黄草(Penthorum chinense Pursh)学名扯根菜，又名水杨柳、水泽兰，为虎耳草科(saxifraganceae)扯根菜属扯根菜的地上部分，是四川泸州古蔺出产的一种苗家药材。始载于明代《救荒本草》，现载于《中药大辞典》、《全国中草药汇编》、《四川中药志》、《湖南药物志》、《内蒙古植物药志》等。民间以全草入药，性温，味甘，无毒，具有清热解毒、活血散瘀、利水消肿、退黄、平肝的功效，可治经闭、水肿、血崩、带下、跌打损伤。现代研究表明赶黄草内含多种有效成份均对肝损伤具保护作用，并对甲肝、乙肝、慢性活动性肝炎具有一定的治疗作用，但民间流传赶黄草有减弱男性性功能的副作用。本研究探讨赶黄草对雄性大鼠正常性功能的影响，为赶黄草在新食品原料的开发应用，以及民间流言的科学与否提供实验依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，旨在研究赶黄草对雄性大鼠正常性功能的影响。本专利技术是这样实现的，一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法将大鼠随机分为空白对照组，阳性对照15mg/kg万艾可组和赶黄草三个剂量组0.5g生药/kg、1.0g生药/kg、2.0g生药/kg，连续灌胃14d，进行试验，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。进一步，赶黄草水提浓缩液的制备方法为：按《中国药典》2015版有关最细粉的规范要求将赶黄草粉碎为125μm<粒径<150μm的中药最细粉；实验时称取1kg赶黄草粉，加蒸馏水10L，加热至80～90℃，
浸泡提取30～60min，过滤，收集浸泡提取液，残渣加蒸馏水10L，加热至80～90℃浸泡提取30～60min，过滤，合并浸泡提取液，将浸泡提取液在60～70℃减压浓缩至0.5L得水提浓缩液，该水提浓缩液浓度为：赶黄草粉2.0g/mL。进一步，赶黄草对正常雄性大鼠交配能力的影响的实验方法为：步骤一、SD大鼠30只，雄性，体重180±20g，按体质量序随机分为4组：空白对照组、万艾可对照组及赶黄草低、中、高三个剂量组，每日灌胃1次，连续给药28d；步骤二、取30只雌性大鼠，体质量180±20g，腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液，0.14mL/100g麻醉，行双侧卵巢摘除术，术后连续3d肌肉注射青霉素2万U/kg，术后2W分组实验，实验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黄体酮500ug/只；步骤三、将雄性大鼠单独放人笼中使其适应环境5min，然后放人1只雌鼠，开始记录下列数据：自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的时间；20min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背的动作次数；雄鼠自爬背成功后出现舔阴茎的时间；20min内雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出现舔阴茎的次数；步骤四、对性器官重量的影响实验结束后，用T-100型电子天平称取小鼠体重，处死动物，剖腹取睾丸和附睾，去尽筋膜，滤纸吸干脏器表面血污，用赛多利斯BS200S-WE1型电子天平称睾丸和附睾重量，计睾丸或附睾指数：睾丸指数＝睾丸重量(mg)/体重(g)附睾指数＝附睾重量(mg)/体重(g)。进一步，对大鼠阴茎勃起功能的影响的实验方法为：灌胃第28d，末次灌胃后1h，将4mA电流强度刺激大鼠阴茎头部，记录刺激开始至阴茎勃起时间和阴茎勃起持续时间。进一步，对正常雄性大鼠精子的影响的实验方法为：灌胃第28d，取大鼠左侧附睾，在附睾尾纵向划一个小口，置于含10％动物血清的3mL RPMI-1640培养基内孵育15min，制备精子悬液，取少量精子悬液
用培养基稀释50倍，加到血球计数板上，在2730℃条件下用高倍镜随机观察200个精子的活动状态，并统计精子存活率。进一步，给药方法为：低剂量组：取赶黄草水提浓缩液100mL，加入1900mL双蒸水，按0.5mL/100g体重灌胃；中剂量组：取赶黄草水提浓缩液100mL，加入900mL双蒸水，按0.5mL/100g体重灌胃；高剂量组：取赶黄草水提浓缩液100mL，加入400mL双蒸水，按0.5mL/100g体重灌胃；万艾可组：万艾可压成粉末并用生理盐水配成浓度为1.5mg/mL的溶液，按1mL/100g体重灌胃。本专利技术发现阳性对照万艾可明显缩短雄性大鼠捕捉潜伏期和射精潜伏期，增加捕捉次数和射精次数，与空白对照比较，P＜0.05，提示万艾可能提高雄性大鼠的交配能力，说明本研究方法可靠。但赶黄草连续灌胃28天，三个剂量组分别相当于临应用量(0.1g生药/kg)的5倍、10倍和20倍，动物行为活动如常，一般情况良好。实验各组动物交配能力、性器官指数、阴茎勃起功能、精子存活率等无明显促进或抑制作用，与空白对照组比较未见明显差异(P>0.05)。因此，赶黄草对雄性大鼠正常性功能无明显影响，长期应用安全。附图说明图1是本专利技术实施例提供的赶黄草对正常雄性大鼠交配能力的影响的实验方法流程图。具体实施方式为能进一步了解本专利技术的
技术实现思路
、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下。请参阅图1：实验动物，SD大鼠，体重180±20g，雌雄各半，购自西南医科大学实验
动物中心，生产许可证号：SCXK(川)2013-17，使用许可证号：SCXK(川)2013-065。实验环境，实验在西南医科大学SPF级实验中心进行，动物为笼养(笼具容积为20cm×39cm×54cm)，每笼饲养同性别动物5只。基础饲料为实验鼠全价颗粒饲料，各组动物常规喂饲，自由饮水。笼底垫料为刨花木屑，使用前经消毒烘干；笼具经消毒后使用。平均每隔2日更换一次垫料。温度：空调恒温，约22-25℃。一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，将大鼠随机分为空白对照组，阳性对照15mg/kg万艾可组和赶黄草三个剂量组0.5g生药/kg、1.0g生药/kg、2.0g生药/kg，连续灌胃14d，进行试验，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。进一步，赶黄草水提浓缩液的制备方法为：按《中国药典》2015版有关最细粉的规范要求将赶黄草粉碎为125μm<粒径<150μm的中药最细粉；实验时称取1kg赶黄草粉，加蒸馏水10L，加热至80～90℃，浸泡提取30～60min，过滤，收集浸泡提取液，残渣加蒸馏水10L，加热至80～90℃浸泡提取30～60min，过滤，合并浸泡提取液，将浸泡提取液在60～70℃减压浓缩至0.5L得水提浓缩液，该水提浓缩液浓度为：赶黄草粉2.0g/mL。进一步，赶黄草对正常雄性大鼠交配能力的影响的实验方法为：S101、SD大鼠30只，雄性，体重180±20g，按体质量序随机分为4组：空白生理盐水对照组、15mg/kg万艾可对照组及赶黄草低、中、高三个剂量组，每日灌胃1次，连续给药28d；S102、取30只雌性大鼠，体质量180±20g，腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液，0.14mL/100g麻醉，行双侧卵巢摘除术，术后连续3d肌肉注射青霉素2万U/kg，术后2W分组实验，实验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黄本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，其特征在于，所述赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法将大鼠随机分为空白对照组，阳性对照15mg/kg万艾可组和赶黄草三个剂量组0.5g生药/kg、1.0g生药/kg、2.0g生药/kg，连续灌胃14d，进行试验，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。

【技术特征摘要】
1.一种赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，其特征在于，所述赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法将大鼠随机分为空白对照组，阳性对照15mg/kg万艾可组和赶黄草三个剂量组0.5g生药/kg、1.0g生药/kg、2.0g生药/kg，连续灌胃14d，进行试验，测定赶黄草对大鼠交配能力、性器官重量、阴茎勃起功能、正常雄性大鼠精子的影响。2.如权利要求1所述赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，其特征在于，赶黄草水提浓缩液的制备方法为：按《中国药典》2015版有关最细粉的规范要求将赶黄草粉碎为125μm<粒径<150μm的中药最细粉；实验时称取1kg赶黄草粉，加蒸馏水10L，加热至80～90℃，浸泡提取30～60min，过滤，收集浸泡提取液，残渣加蒸馏水10L，加热至80～90℃浸泡提取30～60min，过滤，合并浸泡提取液，将浸泡提取液在60～70℃减压浓缩至0.5L得水提浓缩液，该水提浓缩液浓度为：赶黄草粉2.0g/mL。3.如权利要求1所述赶黄草对雄性大鼠正常性功能影响的实验方法，其特征在于，赶黄草对正常雄性大鼠交配能力的影响的实验方法为：步骤一、SD大鼠30只，雄性，体重180±20g，按体质量序随机分为4组：空白对照组、万艾可对照组及赶黄草低、中、高三个剂量组，每日灌胃1次，连续给药28d；步骤二、取30只雌性大鼠，体质量180±20g，腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液，0.14mL/100g麻醉，行双侧卵巢摘除术，术后连续3d肌肉注射青霉素2万U/kg，术后2W分组实验，实验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黄体酮500ug/只；步骤三、将雄性大鼠单独放人笼中使其适应环境5min，然后放人1只雌鼠，开始记录下列数据：自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉...

【专利技术属性】
技术研发人员：税丕先，刘明华，李婷，刘中飞，孙琴，朱烨，
申请(专利权)人：西南医科大学，
类型：发明
国别省市：四川;51