【技术实现步骤摘要】
本申请涉及细胞工程，具体涉及一种sirt6永生化hucmscs及其构建方法、sirt6外囊泡及其提取方法。
技术介绍
1、人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells，hmscs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，具有广阔的临床应用前景。近年来，研究人员发现hmscs在骨关节炎(oa)修复中具有较大的潜力。然而研究过程中发现，在hmscs长期离体培养过程中，容易出现遗传不稳定性、染色体结构变化、细胞增殖能力下降、细胞衰老严重等问题。针对上述问题，研究人员经过多年努力，通过基因操作实现了细胞的永生化。
2、外囊泡(evs)是由hmscs产生的双层脂质膜结构的微小囊泡，作为细胞通信的重要介质，evs能够携带蛋白质、rna和其他生物大分子，参与调节生物体内的多种生理和病理过程。由于evs具有低免疫原性、稳定性高、可以自然穿越生物屏障的特性，其已成为治疗oa等疾病最有吸引力的选择。然而，用于oa疾病等临床治疗所需的evs的数量通常较高，并且现有的evs治疗效果一般。
【技术保护点】
1.一种SIRT6永生化hUCMSCs的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：hUCMSCs的提取与培养、永生化hUCMSCs的构建、SIRT6永生化hUCMSCs的构建；
2.根据权利要求1所述的SIRT6永生化hUCMSCs的构建方法，其特征在于，所述永生化hUCMSCs的构建方法包括以下步骤：将hUCMSCs接种至培养板，依次加入TERT慢病毒、完全培养基、阳离子聚合物，培养48±2h；然后更换含有嘌呤霉素的完全培养基进行筛选与扩增，获得永生化hUCMSCs。
3.根据权利要求1所述的SIRT6永生化hUCMSCs的构建方法，其特征在于，所...
【技术特征摘要】
1.一种sirt6永生化hucmscs的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：hucmscs的提取与培养、永生化hucmscs的构建、sirt6永生化hucmscs的构建；
2.根据权利要求1所述的sirt6永生化hucmscs的构建方法，其特征在于，所述永生化hucmscs的构建方法包括以下步骤：将hucmscs接种至培养板，依次加入tert慢病毒、完全培养基、阳离子聚合物，培养48±2h；然后更换含有嘌呤霉素的完全培养基进行筛选与扩增，获得永生化hucmscs。
3.根据权利要求1所述的sirt6永生化hucmscs的构建方法，其特征在于，所述sirt6永生化hucmscs的构建方法包括以下步骤：将永生化hucmscs接种至培养板，依次加入sirt6慢病毒、完全培养基、阳离子聚合物，培养48±2h；然后更换含有灭瘟素s的完全培养基进行筛选与扩增，传代5代后不再添加抗生素；当细胞生长至汇合度80% 以上时，按照1：5比例进行传代培养，获得sirt6永生化hucmscs。
4.根据权利要求2或3所述的sirt6永生化hucmscs的构建方法，其特征在于，所述hucmscs和永生化hucmscs的接种密度均为3.5×105个/孔；所述完全培养基为αmem 完全培养基；所述含有嘌呤霉素的完...
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