一种猪胰蛋白酶突变体及其在提高猪胰蛋白酶表达稳定性和活性中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种猪胰蛋白酶突变体及其在提高猪胰蛋白酶表达稳定性和活性中的应用，涉及基因工程领域。本发明专利技术在一种猪胰蛋白酶的基础上通过定点突变生物技术改造胰蛋白酶分子结构，并利用毕赤酵母菌表达改造后的胰蛋白酶，经实验证明，通过构建的重组毕赤酵母能够提高产量，获得高稳定和高活性的重组胰蛋白酶。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体而言，涉及一种猪胰蛋白酶突变体及其在提高猪胰蛋白酶表达稳定性和活性中的应用。

技术介绍

1、胰蛋白酶trypsin(ec 3.4.21.4)是从牛、羊、猪的胰脏中提取的一种碱性丝氨酸蛋白酶，在脊椎动物中作为消化酶而起作用，其能把特异性地将多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，因此目前被广泛应用于食品和皮革加工、细胞消化、医药以及科学研究等领域，应用价值非常高。

2、胰蛋白酶具有高度保守的三联体催化结构(his，asp，ser)。不同来源的胰蛋白酶催化三联体位置有所不同，其中野生型猪胰蛋白酶(sst)的催化三联体存在于序列位置his48、asp92、ser185，胰蛋白酶原活化后，通过残基之间相互作用对底物进行催化；催化底物与胰蛋白酶特异性结合口袋(asp171、gly194、gly204)进行特异性结合，催化过程通过氧孔离子(gly175、ser177、ser192)来稳定中间产物。

3、猪胰蛋白酶序列中存在4个精氨酸和11个赖氨酸，因此活化后的胰蛋白酶分子也会对其他胰蛋白酶分子的精氨酸和赖氨酸的羧基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种猪胰蛋白酶突变体，其特征在于，所述猪胰蛋白酶突变体的氨基酸序列为以下(A1)-(A3)中的任意一种：

2.与权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体相关的生物材料，其特征在于，为以下(B1)-(B5)中的任意一种：

3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列为以下(C1)-(C2)中的任意一种：

4.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物的构建方法包括：将权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体的编码基因连接到表达载体上，然后将重组载体转化到目的微生物中，筛选获得表达权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体的重组微生物。

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【技术特征摘要】

1.一种猪胰蛋白酶突变体，其特征在于，所述猪胰蛋白酶突变体的氨基酸序列为以下(a1)-(a3)中的任意一种：

2.与权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体相关的生物材料，其特征在于，为以下(b1)-(b5)中的任意一种：

3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列为以下(c1)-(c2)中的任意一种：

4.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物的构建方法包括：将权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体的编码基因连接到表达载体上，然后将重组载体转化到目的微生物中，筛选获得表达权利要求1所述的猪胰蛋白酶突变体的重组微生物。

5.根据权利要求4所述的重组微生物，其特征在于，所述目的微生物包括毕赤酵母菌。

6.一种提高猪胰蛋白酶表达稳定性和活性的方法，其特征在于，包括：构...

【专利技术属性】
技术研发人员：安海谦，车广胜，李成欢，况斌，沈双红，丁文波，
申请(专利权)人：江苏金普诺安生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：