Ltf基因过表达的山羊乳腺上皮细胞的构建方法及应用技术

本发明专利技术提供Ltf基因过表达的山羊乳腺上皮细胞的构建方法及应用，靶向山羊乳腺上皮细胞Ltf基因的gRNA，构建Ltf基因过表达山羊乳腺上皮细胞。该方法包括：利用基因编辑技术，将编码Ltf基因的启动子替换为内源性强表达b‑actin基因的启动子。本发明专利技术设计了特异靶向Ltf基因的gRNA，利用Cas9蛋白向Ltf基因的5’UTR前插入内源性强启动子，从而达到对乳腺上皮细胞进行基因过表达的目的。利用本发明专利技术方法得到的Ltf基因过表达的山羊乳腺上皮细胞，可有效保护乳腺上皮细胞免受LPS诱导的炎症反应。本方法提供了一种构建Ltf过表达的方法，为乳腺炎基因治疗领域提供理论支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体涉及ltf基因过表达的山羊乳腺上皮细胞的构建方法及应用。

技术介绍

1、乳铁蛋白(lactoferrin，ltf)，是一种分子量为80kda的铁结合性糖蛋白，主要存在于乳汁中，具有多种生物学功能，如参与铁代谢、抗炎症、广谱抗菌性、抗病毒等。ltf抗菌作用主要表现在抑菌和杀菌作用；抗病毒的作用表现为不阻止感染后病毒的复制，而是阻止病毒感染细胞而实现其抗病毒活性；另外，ltf由乳腺细胞、白细胞产生，对血液凝固、抗体产生、白细胞介素及肿瘤坏死因子产生、t细胞成熟、前列腺素生成、自然杀伤细胞(nk细胞)激活等过程都有调节作用；另外，研究表明，ltf可增强巨噬细胞和单核细胞对外源微生物的吞噬和对细胞内寄生菌的杀伤作用及促进白细胞在血管内皮细胞上的粘附作用，从而利于白细胞渗出移位到到血管外的炎症部位。

2、ltf具有重要的生物学功能，现已成为国际上研究的一大热点。研究表明，乳中ltf的浓度变化较大，主要受生理状况、泌乳阶段、胎次和品种等影响，但是这方面的研究结果并不完全一致，因此还值得进一步研究。另外，当前研究大多集中于ltf生本文档来自技高网...

【技术保护点】

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7.权利要求1-6任一项所述的方法构建...

【技术特征摘要】

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【专利技术属性】
技术研发人员：邢怡明，白伊丽娜，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：