高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO-FHV-gD细胞株构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及物技术领域，具体涉及一种高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株构建方法及其应用，本发明专利技术对猫疱疹病毒Ⅰ型gD基因密码子进行优化，构建重组质粒，转染至CHO细胞，通过三轮连续加药筛选，获得高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO‑FHV‑gD细胞株，构建的CHO‑FHV‑gD细胞株目的蛋白表达量高。培养CHO‑FHV‑gD细胞，收获细胞培养上清液，进行NTA纯化后，将抗原水相与佐剂混合后乳化制备疫苗。该疫苗安全性好、免疫原性强、生产成本低、工艺简单、批次稳定。基于该蛋白研发抗原夹心荧光微球试纸条抗体检测技术，对于该病防控具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及物，具体涉及一种高表达猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白的cho-fhv-gd细胞株构建方法及其应用。

技术介绍

1、猫疱疹病毒ⅰ型(feline herpesvirus-1，fhv-1)可以引起猫科动物急性、高度接触性上呼吸道疾病，是导致猫上呼吸道疾病的最严重病原。目前，fhv-1已呈世界性流行，发病率可达100％，病死率20％～50％，约80％的猫感染该病毒后终身带毒。常与杯状病毒、衣原体、波士杆菌等混合感染造成多病原呼吸道综合征，严重影响着宠物猫及野生猫科动物的健康。

2、国内主要使用进口灭活疫苗免疫以保护动物机体免受fhv-1感染，尚未拥有自主知识产权的疫苗产品。同时该疫苗未能完全保护机体免受fhv-1的感染，仅能减少该病毒在三叉神经的病毒含量，因此，研制免疫效果更好，更安全的疫苗对于预防fhv-1感染具有重要意义，同时研制更简便、准确的抗体检测技术，对于评估疫苗免疫效果具有重要意义

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种高表达猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白的cho本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高表达猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的CHO-FHV-gD细胞株构建方法，其特征在于：包括以下步骤

2.一种制备猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的方法，其特征在于：所述方法是将权利要求1所述的构建方法得到CHO细胞株在CD04-MSX培养基中培养，离心收获上清纯化得到猫疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白，其中，所述CD04-MSX培养基为CD04基础培养基+50μMMSX；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养条件为：第1、3、5天同时补加FeedA补料培养基和Feed B补料培养基；其中，Feed A补料培养基的添加体积为原培养基的3～7％，Feed B补料培养基的添加体...

【技术特征摘要】

1.一种高表达猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白的cho-fhv-gd细胞株构建方法，其特征在于：包括以下步骤

2.一种制备猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白的方法，其特征在于：所述方法是将权利要求1所述的构建方法得到cho细胞株在cd04-msx培养基中培养，离心收获上清纯化得到猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白，其中，所述cd04-msx培养基为cd04基础培养基+50μmmsx；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述培养条件为：第1、3、5天同时补加feeda补料培养基和feed b补料培养基；其中，feed a补料培养基的添加体积为原培养基的3～7％，feed b补料培养基的添加体积为原培养基的0.3～1％；且培养转速为120r/min，细胞培养基ph值为7.0～7.4。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述feed a补料培养基的添加体积为原培养基的5％，feed b补料培养基的添加体积为原培养基的1％；且培养转速为120r/min，细胞培养基ph值为7.0；所述离心条件为：离心温度为4℃，转速为10000r/min，离心时间为30min。

5.一种权利要求2所述的方法制备的猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白在制备猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白亚单位疫苗中的应用。

6.一种猫疱疹病毒ⅰ型gd蛋白亚单位疫苗，其特征在于：所述疫苗包...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩丽，甘雅琴，叶贵珊，牟林琳，张铃娟，和魁静，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：