检测氯霉素的荧光响应传感体系、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了检测氯霉素的荧光响应传感体系、制备方法和应用，所述传感体系包括（1）固相微萃取探针、（2）发卡DNA和DNAzyme序列修饰的Fe<subgt;3</subgt;O<subgt;4</subgt;@Au纳米粒；所述固相微萃取探针为经cDNA和CAP Aptame修饰的石英棒，其中：cDNA序列为SEQ ID NO.1，CAP Aptame序列为SEQ ID NO.2，发卡DNA序列为SEQ ID NO.3，DNAzyme序列为SEQ ID NO.4。优势在于：（1）借助分散固相微萃取技术，提高检测稳定性与准确性；利用核酸外切酶和DNAzyme剪切原理实现了分析物CAP信号的级联放大，实现了对CAP的高灵敏检测；（2）将抗生素信号转化为核酸信号，实现信号第一步扩增，借助释放的outDNA激活DNA步行机，触发DNAzyme剪切功能，实现荧光信号恢复，完成第二次信号扩增。（3）使用荧光光谱仪进行荧光信号检测，检测限低至28.12 aM，线性范围为0.1 fM‑1 nM。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于食品安全检测分析，涉及固相微萃取、核酸适配体、核酸外切酶及dna步行机引发荧光信号放大及检测方法，具体为检测氯霉素的荧光响应传感体系、制备方法和应用。

技术介绍

1、氯霉素（cap）是一种广谱抗生素，可用于动物养殖中的疾病治疗和细菌感染预防，但cap的滥用会直接导致动物体内蓄积，最终会通过食物链在人体中积累。因此对食品中残留的cap进行高灵敏检测，对于降低抗生素残留的摄入，减少人体内蓄积，避免人体健康受损具有重要意义。食品中cap残留检测存在巨大挑战，如因食品样品中基质复杂，严重影响检测灵敏度；cap与其他抗生素具有相似的结构和性质，干扰检测及鉴定；cap残留通常在纳克和微克级别，常规的检测方法无法检测出。综上所述，开发高效、快捷、高灵敏、高准确度、可靠的cap检测方法至关重要。

2、固相微萃取（solid-phase microextraction, spme）是一种新型样品预处理方法，旨在使目标分析物在样品基质和萃取涂层之间达到分布平衡。该方法可以集取样、提取、浓缩、进样于一体，具有操作简单、提取效率高、样品消耗少、效率高等优本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.检测氯霉素的荧光响应传感体系，其特征在于，所述传感体系包括（1）固相微萃取探针、（2）发卡DNA和DNAzyme序列修饰的Fe3O4@Au纳米粒；所述固相微萃取探针为经cDNA和CAPAptame修饰的石英棒，其中：cDNA序列为SEQ ID NO.1，CAP Aptame序列为SEQ ID NO.2，发卡DNA序列为SEQ ID NO.3，DNAzyme序列为SEQ ID NO.4。

2.权利要求1所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，S1...

【技术特征摘要】

1.检测氯霉素的荧光响应传感体系，其特征在于，所述传感体系包括（1）固相微萃取探针、（2）发卡dna和dnazyme序列修饰的fe3o4@au纳米粒；所述固相微萃取探针为经cdna和capaptame修饰的石英棒，其中：cdna序列为seq id no.1，cap aptame序列为seq id no.2，发卡dna序列为seq id no.3，dnazyme序列为seq id no.4。

2.权利要求1所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，s1中食人鱼溶液的配方为将体积分数为30%的过氧化氢和98%的浓硫酸按体积比1:3-4混合，室温下反应8-12h制得。

4.根据权利要求2所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，s2中氨基化溶液的配方为将aptes、水、乙醇按体积比1:0.8-1:30-50混合制得。

5.根据权利要求2所述的检测氯霉素的荧光响应传感体系的制备方法，其特征在于，s3中活化cdna羧基的方法为：先加入10-20 mg/ml edc，常温活化30min后，等体积加入10-20mg/ml nhs，充分振荡5min。

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【专利技术属性】
技术研发人员：孔德昭，丁超，陈一桐，唐盛，沈薇，刘畅，李雅琪，史巧巧，张琪，李诗洁，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：