【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子诊断，具体涉及用于检测单纯疱疹病毒ⅱ型核酸的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
1、单纯疱疹病毒(herpes simp l ex vi ruses，hsv)属疱疹病毒科，病毒颗粒直径约180纳米，人类是单纯疱疹病毒唯一的自然宿主。
2、根据生物化学、生物学、流行病学等差别目前把hsv分为ⅰ型和ⅱ型，两型病毒核苷酸序列有50％同源性。hsv基因组大约152kb，34个基因，编码100多个多肽(po lypeptides)。其中，g基因编码的晚期蛋白中有11种包膜糖蛋白(gb、gc、gd、ge、gg、gh、g i、gj、gk、gl和gm)。gb和gd与病毒吸附和穿入有关，是与细胞特异性受体相互作用的病毒配体分子。gd诱导产生中和抗体的能力最强，可用于研制疫苗。
3、hsvi主要引起生殖器以外(也有例外)的皮肤、黏膜和器官感染，感染后在三叉神经节的感觉神经细胞中潜伏；临床表现为牙龈和咽颊部成群疱疹、发热、咽喉痛，破溃后形成溃疡，此外还可引起脑炎、皮肤疱疹性湿疹。hsvⅱ主要引起生殖器及腰以下的皮肤疱疹，感染后多潜伏在腰骶背根神经节的感觉神经细胞内。男性表现为阴茎的水泡性溃疡损伤，女性为宫颈、外阴、阴道的水泡性溃疡损伤，并发症包括生殖器外损伤和无菌性脑膜炎，还可能与宫颈癌的高发有关。hsvⅱ通过性接触传播，或由母亲的生殖器感染传递给新生儿。新生儿感染疱疹病毒又具有高发病率(1/2000～1/5000)和高死亡率，从而决定了在孕产妇中开展hsv感染状况检测的重要意义。当孕妇感染hsv时，可以通过剖宫
4、由于培养法的困难和血清学方法的滞后，需寻找更灵敏更快速的方法。近十年来，定量pcr检测方法的建立提供了一种快速、可靠的性病病原检测方法，具有快速，灵敏，定量准确等特点，极大的提高检测的效率，并且节省了样本量。目前大部分定量pcr检测试剂盒采用hsvi/hsvⅱ混合联检的方式，无法同时区分hsvi和hsvⅱ两种型别，增加了检测成本和操作的繁琐度。目前国内外大量报道证明，两种hsv型别高度相似，导致hsv分型检测困难。因此需要设计一种可检测hsvⅱ的试剂盒。
技术实现思路
1、针对现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供用于检测单纯疱疹病毒ⅱ型核酸的试剂盒及其检测方法，高效检测hsvⅱ，具有快速、定量、准确的优点。
2、本专利技术公开了用于检测单纯疱疹病毒ⅱ型核酸的试剂盒，包括以下任一引物探针组：第一引物探针组和第二引物探针组；其中，第一引物探针组包括：seq id no：1、seq idno：2和seq id no：3；第二引物探针组包括：seq id no：7、seq id no：8和seq id no：9，其中，fam为荧光报告基团，bhq1为荧光淬灭基团。
3、优选的，第一引物探针组和第二引物探针组还分别包括以下内参引物探针组：seqid no：4、seq id no：5和seq id no：6，其中，cy5为荧光报告基团，bhq1为荧光淬灭基团。
4、优选的，所述试剂盒还包括pcr反应液，所述pcr反应液包括：pcr缓冲液、dntp/utp、mgc l2、bsa、taq酶、udg酶和ddh2o。
5、优选的，所述pcr反应液还包括牛血清白蛋白(bsa)，bsa的使用浓度为：40ng/μl。
6、优选的，所述第一引物探针组的靶基因为hsvⅱ的ul27基因；
7、所述第二引物探针组的靶基因为hsvⅱ的糖蛋白d基因。
8、优选的，所述试剂盒还包括：阴性对照和阳性对照。
9、优选的，所述试剂盒用于检测hsvⅱ。
10、所述试剂盒的检测方法包括以下步骤：从待测样本提取核酸，获得模板溶液；
11、将模板溶液加入到pcr反应液中；
12、对加入模板溶液的pcr反应液进行pcr扩增；
13、扩增后，检测荧光信号；
14、根据所述检测到的荧光信号获得检测结果。
15、优选的，所述pcr扩增程序包括：
16、50℃处理2分钟，循环数为1；
17、95℃预变性10分钟，循环数为1；
18、95℃变性15秒、64℃退火延伸30秒，循环数为45(此步骤收集荧光信号)；
19、质控检测包括以下条件：阴性对照无扩增，结果为阴性，且在fam、cy5荧光通道下均无ct值或ct值＝45；阳性对照结果为阳性，且在fam、cy5荧光通道下ct值均≤29；
20、优选的，检测结果判断的方法包括：
21、若检测样本在fam通道无ct值或ct值＝45，且内参cy5通道ct值＜45，有典型的s型扩增曲线，样本为hsvⅱ阴性；
22、若检测样本在fam通道ct值≤37，且有明显的扩增曲线，样本为hsvⅱ阳性；
23、若检测样本fam通道37＜ct＜45，且有典型的s型扩增曲线，重新检测待测样本；
24、若重新检测的结果为：fam通道ct值＜45，则判断为hsvⅱ阳性；否则判断为hsvⅱ阴性；
25、若检测样本fam通道无ct值或ct值＝45，且cy5通道无ct值或ct值＝45，则反应无效，重新采样检测。
26、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：通过试剂盒引物探针组，可检测hsvⅱ，具有快速、定量、准确的优点。
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1.用于检测单纯疱疹病毒Ⅱ型核酸的试剂盒，其特征在于，包括以下任一引物探针组：第一引物探针组和第二引物探针组；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针组还包括以下内参引物探针组：
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应液，所述PCR反应液包括：PCR缓冲液、dNTP/UTP、MgCl2、BSA、Taq酶、UDG酶和ddH2O。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括牛血清白蛋白，牛血清白蛋白的使用浓度为：40ng/μL。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一引物探针组的靶基因为HSVⅡ的UL27基因；
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括阴性对照和阳性对照。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测HSVⅡ。
8.根据权利要求1-7任一项所述试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：
<...【技术特征摘要】
1.用于检测单纯疱疹病毒ⅱ型核酸的试剂盒，其特征在于，包括以下任一引物探针组：第一引物探针组和第二引物探针组；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针组还包括以下内参引物探针组：
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括pcr反应液，所述pcr反应液包括：pcr缓冲液、dntp/utp、mgcl2、bsa、taq酶、udg酶和ddh2o。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述pcr反应液还包括牛血清白蛋白，牛血清白蛋白的使用浓度为：40ng/μl。
...【专利技术属性】
技术研发人员：何犇，窦静雅，柳辉，郑文果，毕少辉，
申请(专利权)人：北京康美天鸿生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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