用于黑森瘿蚊LAMP-LFD检测的引物组及其鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种检测黑森瘿蚊的LAMP‑LFD引物组，包括内引物FIP/BIP、外引物F3/B3、特异性探针LF和环引物LB(SEQ ID NO:1～6)。本发明专利技术还提供了鉴定黑森瘿蚊的方法，该方法为：建立LAMP反应体系，用LAMP引物组对待检测基因组DNA进行LAMP扩增，得到LAMP产物；将LAMP产物稀释10倍后滴加到LFD试纸条的加样口，根据试纸条检测线和质控线的显示结果，若出现两条线，测待测虫体为黑森瘿蚊，若只出现一条质控线，则待测虫体不是黑森瘿蚊；或者将所述LAMP产物用2％琼脂糖凝胶电泳检验扩增结果，若出现梯形的DNA条带，则待测虫体为黑森瘿蚊。本发明专利技术具有特异性强、灵敏度高、操作过程简单、检测成本低等优点，解决区分黑森瘿蚊的难题，为今后黑森瘿蚊的检疫检验、疫情监测与防控奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于黑森瘿蚊鉴定，具体涉及一组用于黑森瘿蚊lamp-lfd检测的引物组合、试剂盒和方法。

技术介绍

1、黑森瘿蚊(mayetiola destructor(say))属双翅目(diptera)、瘿蚊科(cecidomyiidae)、瘿蚊亚科(cecidomyiinae)、喙瘿蚊属(mayetiola)，是世界性小麦重要害虫，也是我国进境植物检疫害虫。

2、黑森瘿蚊在国内适生区广泛，我国65％的麦区均适于其定殖发生，一旦在国内扩散蔓延，将对我国小麦安全生产构成严重威胁。因此，加强进境检疫与国内疫情防控对于预防其扩散蔓延意义重大。

3、黑森瘿蚊的鉴定主要依赖成虫的形态特征。形态鉴定方法对标本的完整性和鉴定者的专业水平要求极高；而在进境中截获的虫态均为幼虫和蛹，这两种虫态是目前无法依据形态特征进行鉴定。在口岸检疫中如果不能及时完成对截获虫态的种类鉴定会严重影响货物的通关速度，这与国家倡导的大通关、快速通关的要求不符。此外，在国内采用性诱捕技术进行疫情监测时，往往在诱虫板上会诱捕到很多非靶标种类，且捕获的虫体往往引破损而难以形态识本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测黑森瘿蚊的LAMP-LFD引物组，其特征在于，所述LAMP-LFD引物组包括内引物FIP/BIP、外引物F3/B3、探针LF和环引物LB，所述内引物FIP/BIP包括上游内引物FIP和下游内引物BIP，所述外引物F3/B3包括上游外引物F3和下游外引物B3，所述探针LF和环引物LB包括特异性探针LF和下游环引物LB；

2.根据权利要求1中所述的引物组合，其特征在于所述FIP引物的5'端使用生物素(Biotin)标记，所述的LF环引物的5'端使用异硫氰酸荧光素(FITC)标记。

3.权利要求1或2所述的引物组合在鉴定或检测黑森瘿蚊中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种检测黑森瘿蚊的lamp-lfd引物组，其特征在于，所述lamp-lfd引物组包括内引物fip/bip、外引物f3/b3、探针lf和环引物lb，所述内引物fip/bip包括上游内引物fip和下游内引物bip，所述外引物f3/b3包括上游外引物f3和下游外引物b3，所述探针lf和环引物lb包括特异性探针lf和下游环引物lb；

2.根据权利要求1中所述的引物组合，其特征在于所述fip引物的5'端使用生物素(biotin)标记，所述的lf环引物的5'端使用异硫氰酸荧光素(fitc)标记。

3.权利要求1或2所述的引物组合在鉴定或检测黑森瘿蚊中的应用。

4.一种用于黑森瘿蚊lamp-lfd检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的引物组合。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，包括lamp反应混合液和ag bca dna聚合酶。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于所述lamp反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：张皓，张万龙，高梦瑶，胡想顺，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：