【技术实现步骤摘要】
本申请涉及癌症领域，特别地涉及通过cd19/cd22抗原靶向结构域来同时靶向b细胞抗原cd19和cd22的car以及包含这样的cd19/cd22抗原靶向结构域的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)及其使用方法。
技术介绍
1、癌症是对人健康最致命的威胁之一。仅在美国，癌症每年影响接近130万例新患者，并且其是继心血管疾病之后第二位的主要死亡原因，引起大约四分之一的死亡。实体瘤是大多数这些死亡的原因。尽管在某些癌症的医学治疗方面已取得显著进展，但是在过去的20年中所有癌症的总体5年存活率仅提高约10％。癌症或恶性肿瘤转移并且以不受控制的方式迅速生长，使得治疗极其困难。
2、cd19是85至95kda跨膜细胞表面糖蛋白受体。cd19是蛋白质的免疫球蛋白(ig)超家族的成员，并且包含两个胞外ig样结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域(teddertf,isaacs,cm,1989,j immunol143:712-171)。cd19修饰b细胞受体信号传导，降低b细胞受体对抗原的触发阈值(carter,rh,and fearon,dt,1992,science,256:105-107)，并与cd81和cd21协调以调节这种必需的b细胞信号传导复合物(bradbury,le,kansas gs,levy s,evans rl,tedder tf,1992,j immunol,149:2841-50)。在b细胞个体发育期间，cd19能够独立于抗原受体在祖b细胞(pro-b)、前-前-b细胞
3、cd22，也称为siglec-2(唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素2)，是95kda跨膜表面糖蛋白，并且包含6个ig样c2型结构域和1个ig样v型结构域(uniprot.org/uniprot/p20273#structure，于2017年7月12日访问)。在b细胞个体发育期间，cd22从前b细胞阶段开始在b细胞表面表达，在成熟b细胞上持续，并且在浆细胞上丢失(nitschke l,2009,immunologicalreviews,230:128-143)。cd22包含胞内itim(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序)结构域，其在针对抗原的b细胞受体的接合之后用于下调细胞活化。cd22的抗体结合诱导与shp-1和胞内磷酸酶的共定位，胞内磷酸酶也用于下调基于磷酸化的信号转导(lumb s,fleishcersj,wiedemann a,daridon c,maloney a,shock a,dorner t,2016,journal of cellcommunication and signaling,10:143-151)。与b细胞恶性肿瘤的治疗相关的关键点是：cd22在正常b细胞上以严格受调节的方式表达，但在造血干细胞或成熟浆细胞上不表达，这使得cd22成为b细胞白血病的合适靶抗原。cd22在成人和儿童(前b-all)b细胞恶性肿瘤二者上的表达已导致利用该靶标进行基于抗体和基于嵌合抗原受体(car)-t细胞二者的治疗(haso w,lee dw,shah nn,stetler-stevenson m,yuan cm,pastan ih,dimitrov ds,morgan ra,fitzgerlad dj,barrett dm,wayne as,mackall cl,orentas rj,2013,blood,121:1165-1174)(wayne as,kreitman rj,findley hw,lew g,delbrook c,steinberg sm,stetler-stevenson m,fitzgerald dj,pastan i,2010,clinical cancer research,16:1894-1903)。
4、已开发出许多新的治疗b细胞白血病和淋巴瘤的方法，包括与细菌毒素或化学治疗剂连接的抗cd22抗体(wayne as,fitzgerald dj,kreitman rj,pastan i,2014,immunotoxins for leukemia,blood,123:2470-2477)。奥英妥珠单抗(inotuzumabozogamicin)(cmc-544，鼠单克隆抗体的一种人源化形式g5/44)是一种抗体药物缀合物，并且其作为单一药剂或与化学治疗组合给予，目前正在临床试验中被评价(nct01664910，主办者：m.d.anderson cancer center)(dijoseph jf,et al.,2004,blood,103:1807-1814)。作为单一药剂，结局胜过在标准治疗情况下所观察到的结局，但是注意到了显著的肝毒性(kantarjian h,et al.,2016,inotuzumb ozogamicin versus standard therapyfor acute lymphoblastic leukemia,new england journal of medicine,375:740-753)。未经修饰的cd22治疗性抗体依帕珠单抗(epratuzumab)也正在与化学治疗组合进行测试(nct01219816，主办者：nantes university hospital)。依帕珠单抗是一种嵌合蛋白，其由接枝到人抗体框架上的鼠cdr构成。尽管在一些白血病中有效，但mosetumomabpasudotox由于与该抗体融合的细菌毒素的免疫原性以及与其他药剂的活性水平适度或相当的这两个问题而并不在广泛的临床开发中(参见nct01829711，主办者：medimmune,llc)。迄今为止，car构建体中使用的许多cd22结合部分都利用了来自于这些鼠抗体的结构域，并且不能有效地活化靶向该cd22结构域的t细胞(例如用作moxetumomab pasudotox基础的ha22抗cd22结合剂，参见james se,greenberg pd,jensen mc,lin y,wang j,till bg,raubitschek aa,forman sj,press 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.编码CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)的分离的核酸分子，所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)包含至少一个包含CD19/CD22抗原结合结构域的胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述CD19/CD22串联嵌合抗原受体(CAR)由包含SEQ ID NO.1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码。
2.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述CAR由核苷酸序列编码，所述核苷酸序列由SEQ ID NO.1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82组成。
3.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述CAR包含SEQ ID NO.2、4、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81或83的氨基酸序列。
4.嵌合抗原受体(CAR)，其由权利要求1所述的分离的核酸分子编码。
5.载体，其包含权利要求1所述的核酸分子。
6.权利要求5所述的载体，其中所述载体选自：质粒载体、黏粒载体、疱疹
7.权利要求5所述的载体，其中所述载体选自DNA载体或RNA载体。
8.分离的细胞，其包含权利要求5所述的载体。
9.制备细胞的方法，其包括用权利要求5所述的载体转导T细胞。
10.药物组合物，其包含抗肿瘤有效量的人T细胞群，其中所述T细胞群包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中所述CAR由包含SEQ ID NO:1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码，并且其中所述T细胞是患有癌症的人的T细胞。
11.在有此需要的对象中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用包含抗肿瘤有效量的T细胞群的药物组合物，其中所述T细胞群包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中所述CAR由包含SEQ ID NO:1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码。
12.权利要求11所述的方法，其中所述癌症是血液学癌症。
13.权利要求12所述的方法，其中所述血液学癌症是白血病、淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
14.权利要求13所述的方法，其中所述白血病是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)或慢性髓细胞性白血病(CML)。
15.权利要求13所述的方法，其中所述淋巴瘤是套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤。
16.权利要求11所述的方法，其中所述癌症是口腔和咽癌、消化系统癌症、呼吸系统癌症、骨和关节癌、软组织癌、皮肤癌、儿科癌症、中枢神经系统的癌症、乳腺癌、生殖系统癌症、泌尿系统癌症、眼和眶的癌症、内分泌系统癌症、脑癌、或其组合。
...【技术特征摘要】
1.编码cd19/cd22串联嵌合抗原受体(car)的分离的核酸分子，所述cd19/cd22串联嵌合抗原受体(car)包含至少一个包含cd19/cd22抗原结合结构域的胞外抗原结合结构域、至少一个跨膜结构域和至少一个胞内信号传导结构域，其中所述cd19/cd22串联嵌合抗原受体(car)由包含seq id no.1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的核苷酸序列编码。
2.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述car由核苷酸序列编码，所述核苷酸序列由seq id no.1、3、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82组成。
3.权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述car包含seq id no.2、4、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81或83的氨基酸序列。
4.嵌合抗原受体(car)，其由权利要求1所述的分离的核酸分子编码。
5.载体，其包含权利要求1所述的核酸分子。
6.权利要求5所述的载体，其中所述载体选自：质粒载体、黏粒载体、疱疹病毒载体、麻疹病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体，或其组合。
7.权利要求5所述的载体，其中所述载体选自dna载体或rna载体。
8.分离的细胞，其包含权利要求5所述的载体。
9.制备细胞的方法，其包括用权利要求5所述的载体转...
【专利技术属性】
技术研发人员：迪娜·施奈德，里马斯·J·奥伦塔什，博罗·德罗普利奇，胡培荣，
申请(专利权)人：莱蒂恩技术公司，
类型：发明
国别省市：
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