【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种胰蛋白酶的单克隆抗体，以及对分泌该胰蛋白酶的单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其单克隆抗体的应用，具体应用特别涉及到对胰蛋白酶含量的检测、及用于封闭胰蛋白酶活性的应用。
技术介绍
1、猪胰蛋白酶（trypsin）是由猪胰腺分泌的一种水解酶，不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用，是特异性最强的蛋白酶。在蛋白质测序中，胰蛋白酶是重要的工具酶；在临床检测、治疗和研究中，胰蛋白酶的含量是一个重要的检测标志物；在疫苗和药品生产过程中，胰蛋白酶也有重要的用途，例如用于蛋白类药物的生产、细胞的分离、疫苗的生产以及细胞分析用组织样本的制备。在生物制品中，胰蛋白酶残留可能会引发一些潜在的危害，例如可能会导致过敏等不良反应，尤其是那些对蛋白质过敏或对胰蛋白酶过敏的人群，为确保安全性和合规性，需要进行充分的测试和评估、严格控制生物制品中胰蛋白酶的残留量。然而，现行的药品生产与质量控制要求中尚未收录对胰蛋白酶及其残留量的检测项目，滞后于对药品生产与质量控制的总体要求，不仅会因细胞培养等过程使用胰酶带来潜在的风险，还会给相关生物制品在临床上的使用增加安全隐患。因此，对胰蛋白酶检测的深入研究，对人体健康、生产质量控制等领域有重要作用。
2、测定胰蛋白酶的方法主要有紫外分光光度法、放射性元素标记法、质谱法（ms）、液相色谱法（hplc）、电泳法和免疫法等。传统的检测胰蛋白酶含量的方法为紫外分光光度法，但此方法检测胰蛋白酶的步骤较多，操作繁琐，而且检测灵敏度较低；而用紫外吸收法测定，
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于至少部分地克服现有技术的缺陷，提供2株杂交瘤细胞系、对应分泌的2株胰蛋白酶单克隆抗体。
2、本专利技术的目的还在于提供一种高灵敏性、高特异性的胰蛋白酶的定量检测体系。
3、本专利技术的目的还在于提供一种封闭胰蛋白酶活性的方法。
4、为达到上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
5、第一方面，本专利技术提供了一种胰蛋白酶的单克隆抗体，包括单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9，单克隆抗体mcab1的重链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seq id no:1-3所示的mcab1-hcdr1、mcab1-hcdr2和mcab1-hcdr3，单克隆抗体mcab1的轻链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seq id no:5所示的mcab1-lcdr1、was所示的mcab1-lcdr2和seq id no:6所示的mcab1-lcdr3；或者，单克隆抗体mcab9的重链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seq id no:8-10所示的mcab9-hcdr1、mcab9-hcdr2和mcab9-hcdr3，单克隆抗体mcab9的轻链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seq id no:12所示的mcab9-lcdr1、nsk所示的mcab9-lcdr2和seq idno:13所示的mcab9-lcdr3。
6、根据本专利技术的一个优选实施例，胰蛋白酶的单克隆抗体中，单克隆抗体mcab1的重链可变区具有seq id no:4所示的氨基酸序列，单克隆抗体mcab1的轻链可变区具有seq idno:7所示的氨基酸序列；或者，单克隆抗体mcab9的重链可变区具有seq id no:11所示的氨基酸序列，单克隆抗体mcab9的轻链可变区具有seq id no:14所示的氨基酸序列。
7、第二方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞系，用于分泌产生胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9。
8、第三方面，本专利技术提供了一种多核苷酸，编码胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9的重链可变区和/或轻链可变区所示的氨基酸序列。
9、第四方面，本专利技术提供了一种包含多核苷酸的重组dna表达载体，该重组dna表达载体中包含编码胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9的重链可变区和/或轻链可变区所示的氨基酸序列的dna序列。
10、第五方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，转染重组dna表达载体，该宿主细胞包含大肠杆菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
11、第六方面，本专利技术提供了一种生物制品或检测试剂，包含胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9。
12、根据本专利技术的一个优选实施例，检测试剂中还包括样品稀释液，其中，样品稀释液包括柠檬酸缓冲液、0.5% bsa，样品稀释液的ph为6.0。
13、根据本专利技术的一个优选实施例，检测试剂为胰蛋白酶含量检测的试剂，胰蛋白酶为猪胰蛋白酶。
14、根据本专利技术的一个优选实施例，检测试剂采用双抗体夹心elisa方法对胰蛋白酶进行定量检测，酶标板上的包被抗体包括单克隆抗体mcab1，标记抗体包括生物标记物标记的单克隆抗体mcab9。
15、优选地，包被抗体中mcab1的浓度为1~5μg/ml，包被用量为50~150μl/孔；标记抗体中生物标记物标记的mcab9的浓度为500~1500 μg/ml，被1:1000稀释后，用量为50~150μl/孔。
16、优选地，标记抗体包括但不限于酶标抗体，生物标记物包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素等。
17、第七方面，本专利技术提供了一种胰蛋白酶含量的检测方法，采用双抗体夹心elisa本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.胰蛋白酶的单克隆抗体，其特征在于，包括单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9，所述单克隆抗体McAb1的重链可变区的3个互补决定区CDR具有如下氨基酸序列：SEQID NO:1-3所示的McAb1-HCDR1、McAb1-HCDR2和McAb1-HCDR3，所述单克隆抗体McAb1的轻链可变区的3个互补决定区CDR具有如下氨基酸序列：SEQ ID NO:5所示的McAb1-LCDR1、WAS所示的McAb1-LCDR2和SEQ ID NO:6所示的McAb1-LCDR3；或者
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体McAb1的重链可变区具有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述单克隆抗体McAb1的轻链可变区具有SEQ IDNO:7所示的氨基酸序列；或者
3.一种杂交瘤细胞系，其特征在于，用于分泌产生权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9。
4.一种多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9
5.一种包含如权利要求4所述的多核苷酸的重组DNA表达载体，其特征在于，所述重组DNA表达载体中包含编码权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9的重链可变区和/或轻链可变区所示的氨基酸序列的DNA序列。
6.一种宿主细胞，其特征在于，转染如权利要求5所述的重组DNA表达载体，所述宿主细胞包含大肠杆菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞。
7.一种包含权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9的生物制品或检测试剂。
8.一种胰蛋白酶含量的检测方法，其特征在于，采用双抗体夹心ELISA方法进行定量检测，酶标板上的包被抗体包括如权利要求1所述的单克隆抗体McAb1，所述标记抗体包括生物标记物标记的如权利要求1所述的单克隆抗体McAb9，对胰蛋白酶的定量检测下限为0.3ng/mL。
9.一种胰蛋白酶的单克隆抗体的应用，其特征在于，权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9，被应用于与胰蛋白酶特异性结合后封闭胰蛋白酶的活性。
10.权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体，在制备胰蛋白酶含量检测的试剂中的应用。
11.一种封闭胰蛋白酶的活性位点的方法，其特征在于，将胰蛋白酶与权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体McAb1和/或单克隆抗体McAb9一起进行孵育。
...【技术特征摘要】
1.胰蛋白酶的单克隆抗体，其特征在于，包括单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9，所述单克隆抗体mcab1的重链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seqid no:1-3所示的mcab1-hcdr1、mcab1-hcdr2和mcab1-hcdr3，所述单克隆抗体mcab1的轻链可变区的3个互补决定区cdr具有如下氨基酸序列：seq id no:5所示的mcab1-lcdr1、was所示的mcab1-lcdr2和seq id no:6所示的mcab1-lcdr3；或者
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体mcab1的重链可变区具有seq id no:4所示的氨基酸序列，所述单克隆抗体mcab1的轻链可变区具有seq idno:7所示的氨基酸序列；或者
3.一种杂交瘤细胞系，其特征在于，用于分泌产生权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9。
4.一种多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1-2任一项中所述的胰蛋白酶的单克隆抗体mcab1和/或单克隆抗体mcab9的重链可变区和/或轻链可变区所示的氨基酸序列。
5.一种包含如权利要求4所述的多核苷酸的重组dna表达载体，其特征在于，所述重组dna表达载体中包含编码权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘欢，张灵峰，杨雪敏，贾继宗，王丽娜，储霞飞，褚建平，
申请(专利权)人：北京万泰生物药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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