一种靶向编辑猪PNPLA3基因的sgRNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及动物基因工程技术领域，具体涉及一种靶向编辑猪PNPLA3基因的sgRNA及其应用。本发明专利技术所提供的sgRNA靶向猪PNPLA3基因外显子第444位核苷酸，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术提供的sgRNA，通过CRISPR/Cas9技术实现猪胎儿成纤维细胞PNPLA3基因外显子第444位核苷酸c.444C>G编辑，所获得的点突变后的猪胎儿成纤维细胞，其遗传基础与人一致，为深入研究PNPLA3基因在糖脂调节中的机制，以及为体细胞核移植获得代谢紊乱相关脂肪性肝病猪模型提供了一种可行的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及动物基因工程，尤其涉及一种靶向编辑猪pnpla3基因的sgrna及其应用。

技术介绍

1、代谢功能障碍相关脂肪变性肝病（metabolic dysfunction-associatedsteatotic liver disease，masld）是世界上最普遍的肝脏疾病之一，影响着全球约25%的人口。masld 通常与肥胖和胰岛素抵抗相关，它的进展从最初单纯的脂肪变性，进展到以肝小叶炎症和肝细胞气球样变为特征代谢功能障碍相关脂肪变性肝炎；若未得到有效诊断和治疗，则会继续发展为器官损伤或肝硬化，最终导致肝细胞癌的发生。当masld进展到其终末阶段肝癌，患者往往需要进行肝移植以挽救生命。

2、masld具有多因素发病机制，涉及环境因素和遗传因素的密切相互作用。大量研究表明，人类pnpla3（patatin-like phospholipase domain-containing 3）基因中的rs738409 c>g单核苷酸突变体导致其蛋白质组成氨基酸序列中第148位异亮氨酸残基突变为甲硫氨酸残基，通常被称为i148m，与多种代谢紊本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种靶向编辑猪PNPLA3基因的靶标序列，其特征在于，所述靶标序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种靶向编辑猪PNPLA3基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列及其互补核苷酸序列，如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

3.编辑猪PNPLA3基因外显子所用的同源重组供体ssODN，其特征在于，所述同源重组供体ssODN上猪PNPLA3基因外显子第444位核苷酸为G，所述同源重组供体ssODN的序列如SEQID NO.9所示。

4.鉴定权利要求2所述sgRNA序列的引物，其特征在于，所述引物用于...

【技术特征摘要】

1.一种靶向编辑猪pnpla3基因的靶标序列，其特征在于，所述靶标序列的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.一种靶向编辑猪pnpla3基因的sgrna序列，其特征在于，所述sgrna的核苷酸序列及其互补核苷酸序列，如seq id no.3和seq id no.4所示。

3.编辑猪pnpla3基因外显子所用的同源重组供体ssodn，其特征在于，所述同源重组供体ssodn上猪pnpla3基因外显子第444位核苷酸为g，所述同源重组供体ssodn的序列如seqid no.9所示。

4.鉴定权利要求2所述sgrna序列的引物，其特征在于，所述引物用于验证权利要求2所述的sgrna序列对猪pnpla3基因外显子第444位核苷酸编辑效果，其核苷酸序列如seq idno.11和seq idno.12所示。

5.含有权利要求2所述sgrna序列的重组表达载体。

6.权利要求1所述的靶标序列或...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨述林，张凯艺，王彦芳，吴添文，陶聪，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：