一种用于构建II型胶原蛋白人源化模型猪的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种用于构建II型胶原蛋白人源化模型猪的方法及其应用，属于基因修饰技术领域。本发明专利技术首先提供了一种靶向编辑猪Ⅱ型胶原α1基因的CRISPR‑Cas9系统，利用CRISPR/Cas9介导的同源重组方法，将猪COL2A1基因原位替换成人COL2A1基因，并借助体细胞克隆技术构建II型胶原蛋白人源化模型猪，让猪产生与人体更类似的软骨组织，减轻移植后的免疫排斥反应，将有望从根本上解决人源软骨组织短缺的问题，对治疗关节软骨损伤具有重要意义，为关节软骨损伤的治疗提供了可供选择的、更好的移植材料。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因修饰，尤其涉及一种用于构建ii型胶原蛋白人源化模型猪的方法及其应用。

技术介绍

1、骨关节炎(osteoarthritis，oa)是全球范围内最常见的慢性关节疾病，据估计，全球有超过2.4亿人口患有症状性骨关节炎。骨关节炎主要发生在中老年人群，常导致关节疼痛、僵硬，甚至导致残疾，严重影响患者的生活质量。随着全球人口老龄化和肥胖人群的增加，这一问题将进一步加剧，给社会医疗保健带来更大的负担。骨关节炎的发病与多种危险因素密切相关，包括年龄增长、肥胖、雌激素缺乏、创伤和遗传易感性等，其病理变化主要包括软骨破坏、软骨下骨硬化、骨赘形成和滑膜炎症等。骨关节炎是导致软骨损伤的主要原因之一。严重软骨损伤的患者需要进行关节软骨移植以改善生活质量。

2、在临床应用中，关节软骨移植材料主要来源于自体软骨、同种异体软骨以及组织工程人工软骨。自体软骨移植适用于治疗小范围的早期软骨损伤，但在大面积修复方面存在限制。同种异体移植相对容易获取，但仍面临来源有限和免疫排斥等问题。此外，与天然软骨相比，人工软骨在生物相容性、结构稳定性和长期功能维持等方面相对较本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种靶向编辑猪Ⅱ型胶原α1基因的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述靶向编辑猪Ⅱ型胶原α1基因的CRISPR-Cas9系统包括靶向猪Ⅱ型胶原α1基因的sgRNA载体和含有人COL2A1蛋白编码序列的同源打靶载体；

2.如权利要求1所述的靶向编辑猪Ⅱ型胶原α1基因的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述人COL2A1蛋白编码序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；

3.如权利要求1所述的靶向编辑猪Ⅱ型胶原α1基因的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述供体DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

4.权利要求1～3任...

【技术特征摘要】

1.一种靶向编辑猪ⅱ型胶原α1基因的crispr-cas9系统，其特征在于，所述靶向编辑猪ⅱ型胶原α1基因的crispr-cas9系统包括靶向猪ⅱ型胶原α1基因的sgrna载体和含有人col2a1蛋白编码序列的同源打靶载体；

2.如权利要求1所述的靶向编辑猪ⅱ型胶原α1基因的crispr-cas9系统，其特征在于，所述人col2a1蛋白编码序列的核苷酸序列如seq id no.7所示；

3.如权利要求1所述的靶向编辑猪ⅱ型胶原α1基因的crispr-cas9系统，其特征在于，所述供体dna的核苷酸序列如seq id no.5所示。

4.权利要求1～3任一项所述的靶向编辑猪ⅱ型胶原α1基因的crispr-cas9系统在构建ii型胶原蛋白人源化转基因细胞系、猪重组胚胎或模型猪中的应用。

5.一种构建ii型胶原蛋白人源化转基因细胞系、猪重组胚胎或模型猪的试剂盒，其特征在于，包含权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖良学，全龙泉，
申请(专利权)人：广州中科飞豚生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：