【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及真核细胞克隆文库的产生,具体地涉及含有编码多种结合物库的dna的真核细胞克隆文库。此外,本专利技术涉及鉴定真核细胞基因组中基因座的方法。
技术介绍
1、wo 2015/166272描述了一种产生含有编码多种结合物库的dna的真核细胞克隆文库的方法。在这种方法中,使用位点特异性核酸酶切割细胞dna中的识别序列,从而创建编码结合物的供体dna可以被整合在其中的整合位点。
2、然而,wo 2015/166272的方法依赖于在真核细胞基因组中特定基因座选择合适的识别序列,以允许生成以高多样性的结合物和/或结合物的一致(uniform)整合和/或结合物的一致转录为特征的文库。wo 2015/166272没有提供此类识别序列或基因座的广泛列表。
3、因此,本领域持续需要一种用于鉴定真核细胞基因组中基因座的方法,所述基因座是用于插入结合物序列的候选物,以及包含可用于产生文库的方法的合适识别序列的真核生物基因组中特定基因座的候选物。
技术实现思路
1、在一方面,提供了
...【技术保护点】
1.一种用于鉴定真核细胞基因组中基因座的方法,所述基因座是用于插入结合物序列的候选物,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,其包括以下进一步步骤:
3.根据权利要求2所述的方法,其包括以下额外步骤:
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中该着陆区序列包含位点特异性核酸酶的识别序列,优选地,其中该核酸酶识别序列为大范围核酸酶识别序列、锌指核酸酶识别序列、TALE核酸酶识别序列或核酸引导的核酸酶识别序列,优选为大范围核酸酶识别序列,优选为I-SceI大范围核酸酶识别序列。
5.根据权利要求4所述的方法,其中将
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于鉴定真核细胞基因组中基因座的方法,所述基因座是用于插入结合物序列的候选物,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,其包括以下进一步步骤:
3.根据权利要求2所述的方法,其包括以下额外步骤:
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其中该着陆区序列包含位点特异性核酸酶的识别序列,优选地,其中该核酸酶识别序列为大范围核酸酶识别序列、锌指核酸酶识别序列、tale核酸酶识别序列或核酸引导的核酸酶识别序列,优选为大范围核酸酶识别序列,优选为i-scei大范围核酸酶识别序列。
5.根据权利要求4所述的方法,其中将该供体dna整合到这些细胞中的步骤g包括在这些细胞内提供位点特异性核酸酶,其中该核酸酶切割包含在该着陆区中的该识别序列。
6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法,其中筛选该供体dna整合的步骤h包括筛选该供体dna编码的一个或多个结合物的展示。
7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法,其中该供体dna进一步包含同源臂,以提高整合效率。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其中该着陆区序列和/或该供体dna序列包含选择标记。
9.在根据权利要求1-8中任一项所述的方法中鉴定的基因座用于构建含有编码多种结合物库的dna的真核细胞克隆文库的用途。
10.一种真核细胞克隆的体外文库,这些克隆表达至少10^3、10^4、10^5、10^6、10^7、10^8或10^9种不...
【专利技术属性】
技术研发人员:科泰·纳奇亚尔·德维·帕蒂班,J·麦考夫迪,
申请(专利权)人:艾恩塔斯有限公司,
类型:发明
国别省市:
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