一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法技术方案

技术编号:42505383 阅读:47 留言:0更新日期:2024-08-22 14:20
本发明专利技术公开了一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,包括:取适量水稻叶片按水稻RNA快速提取试剂盒说明书提取出水稻的RNA,再用逆转录反应试剂合成cDNA;根据已有数据库公布的基因序列,设计OsAFB4基因(LOC_Os02g52230)的特异引物;本发明专利技术以水稻日本晴的cDNA为模板,克隆OsAFB4的CDS,构建不同的原核表达载体并实现在大肠杆菌中的表达。结果显示,pET‑32a‑OsAFB4为最佳融合表达载体,其在大肠杆菌高效表达及纯化的最佳诱导条件为:200μM IPTG诱导,23℃下在LB培养基中培养12小时。该体系有助于进一步了解该蛋白的特性,为后续精准定位其结合生长素类除草剂的关键氨基酸位点及研发抗生长素类除草剂作物新品种奠定了实验基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及蛋白质原核表达,具体是涉及一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法


技术介绍

1、水稻是世界上最重要的粮食作物之一,在水稻生产过程中,杂草危害十分严重,严重时可导致减产40%以上。合理使用除草剂是防控杂草最有效的方法之一。按照作用机理,除草剂可分为乙酰乳酸合成酶(als)抑制剂、5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(epsps)、生长素类抑制剂等二十多类。其中人工合成的生长素类除草剂是化学除草剂中的一个重要大类,其全球施用面积仅次于乙酰乳酸合成酶抑制剂和芳香族氨基酸合成酶抑制剂,是作用方式最强,适用范围最广泛的除草剂品种之一。

2、生长素是一类重要植物激素,通过scf tir1/afb-aux/iaa复合体调节生长素应答基因的转录,促进植物根、茎、叶的生长发育、同时还能调控花器官的发育,影响植物育性、以及影响胚胎形成和种子活力等。人工合成生长素类除草剂模拟了天然植物激素吲哚-3-乙酸(iaa)的作用,扰乱其正常的生长发育过程,最终导致植物死亡。tir1/afbs基因编码f-box蛋白基因,通过与生长素结合,活化转本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述大肠杆菌DH5α培养时间为14小时。

3.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述重组子经菌落PCR鉴定,均得到2004bp的条带。

4.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述电泳为琼脂糖凝胶电泳。

5.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表...

【技术特征摘要】

1.一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述大肠杆菌dh5α培养时间为14小时。

3.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述重组子经菌落pcr鉴定,均得到2004bp的条带。

4.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述电泳为琼脂糖凝胶电泳。

5.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述pet-32a-osafb4转化进大肠杆菌overexpressc43、rosseta2和er2566中。

6.根据权利要求1所述的一种基于水稻生长素受体基因的蛋白质原核表达系统创建方法,其特征在于,所述pgex-4t...

【专利技术属性】
技术研发人员:郭芾冉乐舒庆尧
申请(专利权)人:浙江大学海南研究院
类型:发明
国别省市:

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