一种生产索马甜Ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种生产索马甜Ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株及其构建方法与应用，属于生物技术领域；所述重组里氏木霉菌株Trichoderma reesei DF221207已于2023年12月11日保藏于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏编号为CGMCC No.41002；本发明专利技术利用同源重组技术，以里氏木霉QM6aΔpyr4为宿主，将里氏木霉中纤维二糖水解酶基因cbh1替换为索马甜Ⅰ基因ThaumatinⅠ，在重组里氏木霉菌株中实现索马甜Ⅰ蛋白的异源表达；由于里氏木霉的基因组已被完整测序并被广泛研究，本发明专利技术可以精准控制和调节里氏木霉菌株的构建与重组，有效提高索马甜Ⅰ蛋白的表达量和产品纯度，并且里氏木霉可在大规模培养条件下生长，通过基因工程在里氏木霉中表达索马甜Ⅰ蛋白可广泛应用于索马甜的工业化生产中。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种生产索马甜ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株及其构建方法与应用。

技术介绍

1、丝状真菌里氏木霉(trichoderma reesei)是一种嗜温腐生性的丝状真菌，是纤维素酶、半纤维素酶的主要工业生产菌株。里氏木霉是美国fda认证的食品安全级的工业生产菌株，因为具有自然分泌大量的内源蛋白质到胞外的能力而被广泛应用，其内源性纤维素酶经发酵产量高达100g/l，并且具有与高等哺乳动物相似的糖基化系统，因此里氏木霉因多样的翻译后修饰成为一种表达同源和异源蛋白质的理想重组蛋白表达宿主，并得到国际著名酶制剂公司(如genencor、novozymes等)高度重视，并成功应用于多种药物、化学试剂以及酶试剂的表达和生产。

2、里氏木霉产出的纤维素酶和半纤维素酶广泛被应用于各行业，如cbh1，cbh2，egl1，egl2，xyn1，xyn2和xyn3等。纤维素酶和半纤维素酶的启动子，具有诱导型和高表达量的特征，部分启动子，如cbh1和cbh2启动子，已被成功用于表达异源蛋白质。同时，里氏木霉的发酵工艺成熟，发酵成本较低，为其投入工业化生产本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产索马甜Ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株，其特征在于，所述重组里氏木霉菌株命名为Trichoderma reesei DF221207，已于2023年12月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.41002。

2.如权利要求1所述的一种生产索马甜Ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株，其特征在于，所述重组里氏木霉菌株采用同源重组技术将里氏木霉中纤维二糖水解酶基因cbh1替换为索马甜ⅠThaumatinⅠ基因，在重组里氏木霉菌株中进行索马甜Ⅰ蛋白的异源表达。

3.一种生产索马甜Ⅰ蛋白的重组表达质粒，其特征在于，所述重组表达质粒pPcbh...

【技术特征摘要】

1.一种生产索马甜ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株，其特征在于，所述重组里氏木霉菌株命名为trichoderma reesei df221207，已于2023年12月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号cgmcc no.41002。

2.如权利要求1所述的一种生产索马甜ⅰ蛋白的重组里氏木霉菌株，其特征在于，所述重组里氏木霉菌株采用同源重组技术将里氏木霉中纤维二糖水解酶基因cbh1替换为索马甜ⅰthaumatinⅰ基因，在重组里氏木霉菌株中进行索马甜ⅰ蛋白的异源表达。

3.一种生产索马甜ⅰ蛋白的重组表达质粒，其特征在于，所述重组表达质粒ppcbh1-thaⅰ依次包含纤维素酶基因的启动子序列、索马甜ⅰ蛋白编码的基因序列、纤维素酶基因的终止子序列。

4.如权利要求3所述的一种生产索马甜ⅰ蛋白的重组表达质粒，其特征在于，其构建方法首先采用gibson连接的方式将索马甜ⅰ基因thaumatinⅰ片段与重组表达质粒载体ppcbh1-thaⅰ的片段进行连接；然后将连接产物转化大肠杆菌t1感受态，涂布固体板培养过夜后长出单菌落；最后设计引物vp...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨鑫，赵克东，
申请(专利权)人：福州道福生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：