【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多重pcr引物、试剂盒及检测方法，具体涉及用于检测小麦三种产量性状（株高、不育小穗数和穗长）相关qtl的多重pcr引物、试剂盒及检测方法，属于分子标记辅助育种。
技术介绍
1、小麦是全球种植面积最大的粮食作物，是我国三大粮食作物之一。提高产量是小麦育种的主要目标。在小麦传统育种领域，往往需要通过多年的表型鉴定来筛选综合农艺性状优良品种（系），该过程不仅耗时，而且成本高，操作复杂，严重阻碍小麦新品种（系）更新换代速度。
2、为解决此问题，现代分子标记辅助育种技术应运而生，该技术通过基因型与表型性状紧密相关性来预测目的性状在后代中的表现，可以在育种早期阶段筛选出含有目标基因的个体，从而缩短育种周期、降低成本、提高育种效率，已在农业生物技术中广泛应用。
3、然而，现有分子标记辅助育种技术通常只针对单一性状或单一位点（qtl/基因）进行检测，导致检测过程繁琐、成本增加、效率降低。多重pcr能在同一反应体系中鉴定多个位点，大大节约时间和试剂，具有高效、经济的特点。与单一pcr 相比，多重pcr不仅可以提高pcr产率，而且可以提高dna模板利用率，环节少、周期短。但目前成功应用于小麦的多重pcr引物较少，这是因为多重pcr引物并非单个pcr引物的简单混合，引物组合的设计需要考虑：（1）避免引物间形成二聚体，影响目的片段扩增与检测；（2）各引物与其它扩增片段和模板不存在较大的互补性，扩增片段间同源性不能太高；（3）引物的退火温度尽可能接近，长度差异不能太大；（4）扩增片段大小存在一定差异，以便电泳检测。然
4、专利申请cn115725786a公开了一种用于小麦四种常见病毒（小麦黄花叶病毒、小麦梭条花叶病毒、小麦花叶病毒和小麦线条花叶病毒）的多重pcr检测引物，专利申请cn103525937a公开了一种用于鉴定或辅助鉴定面粉色泽相关基因（如tazds-d1和ppo-a1）的pcr体系（包括多重pcr引物对组），专利申请cn116397049a公开了一种小麦茎基腐病害多种镰刀菌多重pcr检测方法，设计的引物组合可以在单次pcr反应通过多重pcr扩增体系快速检测假禾谷镰刀菌、禾谷镰刀菌、层出镰刀菌和轮枝镰刀菌。目前，针对小麦的多重pcr检测多集中在病害和品质方面，与产量性状有关的多重pcr检测较少，能同时检测株高、不育小穗数和穗长多个产量性状的尚无报道。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的多重pcr引物，以及含有该多重pcr引物的试剂盒，同时还提供利用该多重pcr引物/试剂盒检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的方法。
2、为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
3、一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的多重pcr引物，所述多重pcr引物的序列如seq id no：1至seq id no：6所示。
4、利用前述多重pcr引物检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的方法，具体为：以待测小麦基因组dna为模板，在所述多重pcr引物存在下进行pcr反应，对pcr产物进行电泳分析即完成小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的检测。
5、一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的多重pcr试剂盒，组成如下：seq id no：1所示的上游引物1、seq id no：2所示的下游引物1、seq id no：3所示的上游引物2、seq id no：4所示的下游引物2、seq id no：5所示的上游引物3、seq idno：6所示的下游引物3、taq pcr 预混试剂以及ddh2o。
6、利用前述多重pcr试剂盒检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的方法，包括以下步骤：
7、（1）提取待测小麦的基因组dna，得到dna模板；
8、（2）利用pcr扩增体系采用普通扩增程序进行待测小麦的dna扩增，其中，pcr扩增体系为10μl，具体有：1μl dna模板，0.4μl上游引物1，0.4μl下游引物1，0.4μl上游引物2，0.4μl下游引物2，0.4μl上游引物3，0.4μl下游引物3，5μl 2×taq pcr预混试剂，1.6μlddh2o；
9、（3）利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对pcr产物进行分析，具体的：出现279bp大小的片段时，待测小麦含有降低株高的等位基因；出现452bp大小的片段时，待测小麦含有减少不育小穗数的等位基因；出现336bp大小的片段时，待测小麦含有增加穗长的等位基因。
10、本专利技术的有益之处在于：
11、（1）本专利技术开发的上述多重pcr引物扩增稳定，扩增结果特异性好，可用于小麦分子育种；
12、（2）利用本专利技术开发的上述多重pcr引物可在育种早代实现小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的同时检测，通过一次pcr即可完成，可提高小麦育种分子标记辅助选择效率和准确性，加快品种选育进程。
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1.一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关QTL的多重PCR引物，其特征在于，所述多重PCR引物的序列如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6所示。
2.利用权利要求1所述多重PCR引物检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关QTL的方法，其特征在于，以待测小麦基因组DNA为模板，在权利要求1所述多重PCR引物存在下进行PCR反应，对PCR产物进行电泳分析即完成小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关QTL的检测。
3.一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关QTL的多重PCR试剂盒，其特征在于，组成如下：
4.利用权利要求3所述多重PCR试剂盒检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关QTL的方法，其特征在于，包括以下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种用于检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的多重pcr引物，其特征在于，所述多重pcr引物的序列如seq id no：1至seq id no：6所示。
2.利用权利要求1所述多重pcr引物检测小麦株高、不育小穗数和穗长三种产量性状相关qtl的方法，其特征在于，以待测小麦基因组dna为模板，在权利要求1所述多重pcr引物存在下...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔法，侯静，郭浩儒，贾尊尧，黄振洁，尚东晓，管崇硕，朱达，赵长昊，秦冉，赵春华，吴永振，孙晗，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：
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