【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
在某些方面，本公开涉及用于同种异体细胞疗法中的含有一个或多个修饰(诸如遗传修饰)的工程化细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是免疫低下细胞。
技术介绍
技术实现思路
1、受体对供体同种抗原的致敏作用是包括细胞疗法在内的临床移植疗法面临的一个问题。例如，移植受体的免疫系统排斥同种异体材料的倾向大大降低了移植疗法的潜在功效，并且减少了围绕此类治疗可能产生的积极影响。仍然需要用于用于治疗多种病症和疾患的改良同种异体细胞，包括用于产生避免被受体免疫系统检测到的基于同种异体细胞的疗法的新途径、组合物和方法。
2、在某些方面，本文提供了一种包含修饰的工程化细胞，所述修饰：(a)降低mhc i类链相关蛋白a(mica)和/或mhc i类链相关蛋白b(micb)的表达；(b)增加一种或多种致耐受性因子的表达；和(c)降低一种或多种主要组织相容性复合物i类分子(mhc i类分子)和/或一种或多种mhc ii类分子的表达，其中表达的变化是相对于不包含修饰的同一细胞类型的细胞而言的。
3、在一些实施方...
【技术保护点】
1.一种包含修饰的工程化细胞，所述修饰：
2.如权利要求1所述的工程化细胞，其中所述修饰包括以下的表达降低：
3.如权利要求1或2所述的工程化细胞，其中所述修饰包括B2M、TAP I、NLRC5、CIITA、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DM、HLA-DOA、HLA-DOB、HLA-DQ、HLA-DR、RFX5、RFXANK、RFXAP、NFY-A、NFY-B或NFY-C中的一种或多种的表达降低。
4.如权利要求1-3中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞不表达所述一种或多种MHC I类分子和/或所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种包含修饰的工程化细胞，所述修饰：
2.如权利要求1所述的工程化细胞，其中所述修饰包括以下的表达降低：
3.如权利要求1或2所述的工程化细胞，其中所述修饰包括b2m、tap i、nlrc5、ciita、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dm、hla-doa、hla-dob、hla-dq、hla-dr、rfx5、rfxank、rfxap、nfy-a、nfy-b或nfy-c中的一种或多种的表达降低。
4.如权利要求1-3中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞不表达所述一种或多种mhc i类分子和/或所述一种或多种mhc ii类分子。
5.如权利要求1-4中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞不表达b2m、tapi、nlrc5、ciita、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dp、hla-dm、hla-doa、hla-dob、hla-dq、hla-dr、rfx5、rfxank、rfxap、nfy-a、nfy-b或nfy-c中的一种或多种。
6.如权利要求1-5中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低所述一种或多种mhc i类分子的细胞表面表达来降低所述一种或多种mhc i类分子的表达。
7.如权利要求1-6中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低β-2微球蛋白(b2m)的表达来降低所述一种或多种mhc i类分子的表达。
8.如权利要求7所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低b2m基因活性来降低所述一种或多种mhc i类分子的蛋白质表达。
9.如权利要求7或8所述的工程化细胞，其中所述修饰通过使b2m基因的两个等位基因失活或破坏来降低所述一种或多种mhc i类分子的表达。
10.如权利要求7-9中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过使所有b2m编码序列失活或破坏来降低所述一种或多种mhc i类分子的表达。
11.如权利要求9或10所述的工程化细胞，其中所述失活或破坏包括在所述b2m基因中的插入缺失或所述b2m基因的基因组dna的连续段的缺失。
12.如权利要求11所述的工程化细胞，其中所述插入缺失是移码突变。
13.如权利要求1-12中任一项所述的工程化细胞，其中所述b2m基因被敲除。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述修饰通过crispr相关转座酶、先导编辑或经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)来进行。
15.如权利要求1-14中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过核酸酶介导的基因编辑降低所述一种或多种mhc i类分子的蛋白质表达。
16.如权利要求14或15所述的工程化细胞，其中所述crispr相关转座酶、先导编辑、经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)或核酸酶介导的基因编辑通过选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质来进行：cas3、cas4、cas5、cas8a、cas8b、cas8c、cas9、cas10、cas12、cas12a(cpf1)、cas12b(c2c1)、cas12c(c2c3)、cas12d(casy)、cas12e(casx)、cas12f(c2c10)、cas12g、cas12h、cas12i、cas12k(c2c5)、cas13、cas13a(c2c2)、cas13b、cas13c、cas13d、c2c4、c2c8、c2c9、cmr5、cse1、cse2、csf1、csm2、csn2、csx10、csx11、csy1、csy2、csy3、mad7、锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、大范围核酸酶和crispr相关转座酶。
17.如权利要求15所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑通过靶向所述b2m基因的锌指核酸酶(zfn)、tal效应物核酸酶(talen)或crispr-cas组合来进行。
18.如权利要求17所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合的cas选自cas9或cas12。
19.如权利要求18所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑是通过crispr-cas组合进行的，并且所述crispr-cas组合包含具有靶向结构域的指导rna(grna)，所述靶向结构域与所述b2m基因内的至少一个靶位点互补。
20.如权利要求19所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合是包含所述grna和cas蛋白的核糖核蛋白(rnp)复合物。
21.如权利要求1-20中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低所述一种或多种mhc ii类分子的细胞表面表达来降低所述一种或多种mhc ii类分子的表达。
22.如权利要求1-21中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低ciita的表达来降低所述一种或多种mhc ii类分子的表达。
23.如权利要求22所述的工程化细胞，其中所述修饰通过降低ciita基因活性来降低所述一种或多种mhc ii类分子的蛋白质表达。
24.如权利要求22或23所述的工程化细胞，其中所述修饰通过使ciita基因的两个等位基因失活或破坏来降低所述一种或多种mhc ii类分子的表达。
25.如权利要求21-24中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过使所有ciita编码序列失活或破坏来降低所述一种或多种mhc ii类分子的表达。
26.如权利要求24或25所述的工程化细胞，其中所述失活或破坏包括在所述ciita基因中的插入缺失或所述ciita基因的基因组dna的连续段的缺失。
27.如权利要求26所述的工程化细胞，其中所述插入缺失是移码突变。
28.如权利要求21-27中任一项所述的工程化细胞，其中所述ciita基因被敲除。
29.如权利要求21-28中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰通过核酸酶介导的基因编辑降低所述一种或多种mhc ii类分子的蛋白质表达。
30.如权利要求29所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑通过靶向所述ciita基因的锌指核酸酶(zfn)、tal效应物核酸酶(talen)或crispr-cas组合来进行。
31.如权利要求30所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合的cas选自cas9或cas12。
32.如权利要求29所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑是通过crispr-cas组合进行的，并且所述crispr-cas组合包含具有靶向结构域的指导rna(grna)，所述靶向结构域与所述ciita基因内的至少一个靶位点互补。
33.如权利要求32所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合是包含所述grna和cas蛋白的核糖核蛋白(rnp)复合物。
34.如权利要求28所述的工程化细胞，其中所述修饰通过crispr相关转座酶、先导编辑或经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)来进行。
35.如权利要求34所述的工程化细胞，其中所述crispr相关转座酶、先导编辑、经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)或核酸酶介导的基因编辑通过选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质来进行：cas3、cas4、cas5、cas8a、cas8b、cas8c、cas9、cas10、cas12、cas12a(cpf1)、cas12b(c2c1)、cas12c(c2c3)、cas12d(casy)、cas12e(casx)、cas12f(c2c10)、cas12g、cas12h、cas12i、cas12k(c2c5)、cas13、cas13a(c2c2)、cas13b、cas13c、cas13d、c2c4、c2c8、c2c9、cmr5、cse1、cse2、csf1、csm2、csn2、csx10、csx11、csy1、csy2、csy3、mad7、锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、大范围核酸酶和crispr相关转座酶。
36.一种包含一个或多个修饰的工程化细胞，所述一个或多个修饰：
37.一种包含一个或多个修饰的工程化细胞，所述一个或多个修饰：
38.如权利要求36或37所述的工程化细胞，其中所述一个或多个修饰：
39.如权利要求38所述的工程化细胞，其中所述细胞包含一种或多种mhc i类分子mica和/或micb、以及txnip中的任何一种的敲除、pd-l1和hlae的敲入。
40.如权利要求39所述的工程化细胞，其中所述细胞包含a20/tnfaip3和manf的敲入。
41.如权利要求1-40中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含一个或多个修饰以降低所述mica的表达。
42.如权利要求1-41中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含所述mica在所述工程化细胞上降低的表面表达，任选地其中不存在可检测的表面表达。
43.如权利要求1-42中任一项所述的工程化细胞，其中降低所述mica表达的所述修饰降低所述mica的蛋白质表达。
44.如权利要求42或43所述的工程化细胞，其中在所述工程化细胞上不存在所述mica的可检测的细胞表面表达。
45.如权利要求1-44中任一项所述的工程化细胞，其中降低所述mica的表达的所述修饰降低编码所述mica的mrna表达。
46.如权利要求1-45中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含消除mica基因活性的一个或多个修饰。
47.如权利要求46所述的工程化细胞，其中所述修饰包括所述mica基因的两个等位基因的失活或破坏。
48.如权利要求46或47所述的工程化细胞，其中所述修饰包括所有mica编码序列的失活或破坏。
49.如权利要求47或48所述的工程化细胞，其中所述失活或破坏包括所述mica基因中的插入缺失。
50.如权利要求47-49中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰包括所述mica基因的基因组dna的连续段的移码突变或缺失。
51.如权利要求47-50中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰包括敲除。
52.如权利要求47-51中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰是靶向所述mica基因的核酸酶介导的基因编辑修饰。
53.如权利要求48所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑修饰是锌指核酸酶(zfn)介导的修饰、tal效应物核酸酶(talen)介导的修饰或crispr-cas组合介导的。
54.如权利要求49所述的工程化细胞，其中所述cas选自cas9或cas12。
55.如权利要求49或50所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合介导的修饰包括使用具有靶向结构域的指导rna(grna)，所述靶向结构域与所述mica基因内的至少一个靶位点互补。
56.如权利要求51所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合介导的修饰包括使用包含所述grna和cas蛋白的核糖核蛋白(rnp)复合物。
57.如权利要求51所述的工程化细胞，其中所述修饰通过crispr相关转座酶、先导编辑或经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)来进行。
58.如权利要求57所述的工程化细胞，其中所述crispr相关转座酶、先导编辑、经由位点特异性靶向元件的可编程添加(paste)或核酸酶介导的基因编辑通过选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质来进行：cas3、cas4、cas5、cas8a、cas8b、cas8c、cas9、cas10、cas12、cas12a(cpf1)、cas12b(c2c1)、cas12c(c2c3)、cas12d(casy)、cas12e(casx)、cas12f(c2c10)、cas12g、cas12h、cas12i、cas12k(c2c5)、cas13、cas13a(c2c2)、cas13b、cas13c、cas13d、c2c4、c2c8、c2c9、cmr5、cse1、cse2、csf1、csm2、csn2、csx10、csx11、csy1、csy2、csy3、mad7、锌指核酸酶(zfn)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、大范围核酸酶和crispr相关转座酶。
59.如权利要求1-58中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含降低所述micb的表达的修饰。
60.如权利要求1-59中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含所述micb在所述工程化细胞上降低的表面表达，任选地其中不存在可检测的表面表达。
61.如权利要求1-60中任一项所述的工程化细胞，其中降低所述micb表达的所述修饰降低所述micb的蛋白质表达。
62.如权利要求60或61所述的工程化细胞，其中在所述工程化细胞上不存在所述micb的可检测的细胞表面表达。
63.如权利要求1-62中任一项所述的工程化细胞，其中降低所述micb表达的所述修饰降低编码所述micb的mrna表达。
64.如权利要求1-63中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含消除micb基因活性的修饰。
65.如权利要求64所述的工程化细胞，其中所述修饰包括所述micb基因的两个等位基因的失活或破坏。
66.如权利要求64或65所述的工程化细胞，其中所述修饰包括所有micb编码序列的失活或破坏。
67.如权利要求65或66所述的工程化细胞，其中所述失活或破坏包括所述micb基因中的插入缺失。
68.如权利要求65-67中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰是所述micb基因的基因组dna的连续段的移码突变或缺失。
69.如权利要求65-68中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰是敲除。
70.如权利要求65-69中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰是靶向所述micb基因的核酸酶介导的基因编辑修饰。
71.如权利要求70所述的工程化细胞，其中所述核酸酶介导的基因编辑修饰是锌指核酸酶(zfn)介导的修饰、tal效应物核酸酶(talen)介导的修饰或crispr-cas组合介导的。
72.如权利要求71所述的工程化细胞，其中所述cas选自cas9或cas12。
73.如权利要求71或72所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合介导的修饰包括使用具有靶向结构域的指导rna(grna)，所述靶向结构域与所述micb基因内的至少一个靶位点互补。
74.如权利要求73所述的工程化细胞，其中所述crispr-cas组合介导的修饰包括使用包含所述grna和cas蛋白的核糖核蛋白(rnp)复合物。
75.如权利要求1-74中任一项所述的工程化细胞，其中所述修饰降低nlrc5、trac、trb、cd142、abo、cd38、cd52、pcdh11y、nlgn4y和rhd中的任何一种或多种的表达。
76.如权利要求1-75中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子中的每一种选自由以下组成的组：a20/tnfaip3、c1-抑制剂、ccl21、ccl22、cd16、cd16 fc受体、cd24、cd27、cd35、cd39、cd46、cd47、cd52、cd55、cd59、cd200、cr1、ctla4-ig、dux4、fasl、h2-m3、hla-c、hla-e、hla-e重链、hla-g、ido1、il-10、il15-rf、il-35、manf、mfge8、pd-1、pd-l1或serpinb9。
77.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e。
78.如权利要求1-77中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd24。
79.如权利要求1-78中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括pd-l1。
80.如权利要求1-79中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd46。
81.如权利要求1-80中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd55。
82.如权利要求1-81中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd59。
83.如权利要求1-82中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cr1。
84.如权利要求1-83中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括manf。
85.如权利要求1-84中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括a20/tnfaip3。
86.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e和cd47。
87.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd24、cd47或pd-l1中的一种或多种，包括全部。
88.如权利要求1-76和87中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e、cd24、cd47或pd-l1中的一种或多种，包括全部。
89.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括cd46、cd55、cd59或cr1中的一种或多种，包括全部。
90.如权利要求1-76和89中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e、cd46、cd55、cd59或cr1中的一种或多种，包括全部。
91.如权利要求1-76、89和90中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e、cd24、cd47、pdl1、cd46、cd55、cd59或cr1中的一种或多种，包括全部。
92.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e或pd-l1中的一种或多种，包括全部。
93.如权利要求1-76和92中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e、pd-l1或a20/tnfaip以及任选地manf中的一种或多种，包括全部。
94.如权利要求1-76、92和93中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子包括hla-e、pd-l1或manf、以及任选地a20/tnfaip中的一种或多种，包括全部。
95.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子中的每一种选自由以下组成的组：cd47、pd-l1、hla-e、hla-g、ccl21、fasl、serpinb9、cd200和mfge8。
96.如权利要求1-76中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含根据以下的修饰：
97.如权利要求75所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子中的至少一种是cd47。
98.如权利要求1-75中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子是cd47。
99.如权利要求97或98所述的工程化细胞，其中cd47具有与seq id no:1的氨基酸序列的至少一部分具有至少约85％同一性的氨基酸序列。
100.如权利要求1-99中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子的增加的表达包括所述一种或多种致耐受性因子的增加的细胞表面表达。
101.如权利要求100所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子中的一种是外源多肽。
102.如权利要求100或101所述的工程化细胞，其中所述修饰包含编码所述一种或多种致耐受性因子的一种或多种外源多核苷酸。
103.如权利要求102所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子中的每一种与启动子可操作地连接。
104.如权利要求103所述的工程化细胞，其中所述启动子是组成型启动子。
105.如权利要求103或104所述的工程化细胞，其中所述启动子选自由以下组成的组：cag启动子、巨细胞病毒(cmv)启动子、ef1a启动子、pgk启动子、腺病毒晚期启动子、痘苗病毒7.5k启动子、sv40启动子、hsv的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(mmtv)启动子、hiv的ltr启动子、莫洛尼病毒的启动子、爱泼斯坦巴尔病毒(ebv)启动子、劳斯肉瘤病毒(rsv)启动子和ubc启动子。
106.如权利要求103-105中任一项所述的工程化细胞，其中将所述一种或多种外源多核苷酸整合到一个或多个基因组基因座中。
107.如权利要求106所述的工程化细胞，其中所述整合是非靶向插入。
108.如权利要求107所述的工程化细胞，其中所述非靶向插入是通过使用慢病毒载体将所述外源多核苷酸引入所述细胞中进行的。
109.如权利要求106所述的工程化细胞，其中所述整合是靶向插入。
110.如权利要求106-109中任一项所述的工程化细胞，其中所述一个或多个基因组基因座中的每一个选自由以下组成的组：mica基因座、micb基因座、b2m基因座、ciita基因座、trac基因座或trbc基因座、cd142基因座、ccr5基因座、cxcr4基因座、ppp1r12c(也称为aavs1)基因座、白蛋白基因座、shs231基因座、clybl基因座、rosa26基因座、lrp1基因座、hmgb1基因座、abo基因座、rhd基因座、fut1基因座和kdm5d基因座。
111.如权利要求106-110中任一项所述的工程化细胞，其中所述一个或多个基因组基因座中的每一个选自由以下组成的组：b2m基因座、tap1基因座、ciita基因座、trac基因座、trbc基因座、mic-a基因座、mic-b基因座和安全港基因座。
112.如权利要求106所述的工程化细胞，其中所述安全港基因座选自由以下组成的组：aavs1、abo、ccr5、clybl、cxcr4、f3、fut1、hmgb1、kdm5d、lrp1、mica、micb、rhd、rosa26和shs231基因座。
113.如权利要求1-107中任一项所述的工程化细胞，其中所述一种或多种致耐受性因子的表达增加包括经由启动子增加内源基因的基因活性的修饰。
114.如权利要求113所述的工程化细胞，其中所述增加基因活性的修饰通过修饰内源启动子或引入异源启动子来进行。
115.如权利要求1-114中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于人类细胞或动物细胞，任选地猪细胞、牛细胞或羊细胞。
116.如权利要求115所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于人类细胞。
117.如权利要求1-116中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于从多能干细胞或其后代衍生的分化细胞。
118.如权利要求117所述的工程化细胞，其中所述多能干细胞是或来源于诱导多能干细胞。
119.如权利要求1-118中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于从供体受试者分离的原代细胞。
120.如权利要求119所述的工程化细胞，其中所述供体受试者在从所述供体受试者获得所述原代时是健康的或没有被怀疑患有疾病或疾患。
121.如权利要求1-120中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞选自β胰岛细胞、免疫细胞、b细胞、t细胞、自然杀伤(nk)细胞、自然杀伤t(nkt)细胞、巨噬细胞、视网膜色素上皮细胞、肝细胞、甲状腺细胞、内皮细胞、皮肤细胞、神经胶质祖细胞、神经细胞、肌肉细胞、心脏细胞、血细胞、胰岛细胞、平滑肌细胞、神经胶质祖细胞、神经细胞、心肌细胞、视觉细胞、干细胞、造血干细胞、诱导多能干细胞(ipsc)、间充质干细胞、胚胎干细胞和多能干细胞(psc)。
122.如权利要求1-121中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于内皮细胞。
123.如权利要求1-121中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于上皮细胞。
124.如权利要求1-121中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于多能干细胞。
125.如权利要求1-121中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于胚胎干细胞。
126.如权利要求1-121中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是或来源于间充质谱系的细胞。
127.如权利要求1-126中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞是以下中的一种或多种：abo血型o型；恒河猴因子阴性(rh-)，其包含功能性abo a等位基因和/或功能性abo b等位基因；或恒河猴因子阳性(rh+)。
128.如权利要求1-127中任一项所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞包含嵌合抗原受体(car)。
129.一种细胞群，所述细胞群包含如权利要求1-128中任一项所述的工程化细胞。
130.如权利要求129所述的细胞群，其中所述群体中至少约30％的细胞包含来自权利要求91中任一项的工程化细胞。
131.如权利要求129或130所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含所述修饰。
132.如权利要求129-131中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞具有降低的所述mica多肽的细胞表面表达。
133.如权利要求129-132中任一项所述的细胞群，其中所述工程化细胞上降低的所述mica多肽的表面表达被降低至比在不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞上的所述mica多肽细胞表面表达的水平低60％或更低的水平，任选地其中不存在可检测的表面表达。
134.如权利要求129-133中任一项所述的细胞群，其中所述群体中至少约50％的细胞不具有所述mica多肽的细胞表面表达。
135.如权利要求129-134中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞具有降低的所述micb多肽的细胞表面表达。
136.如权利要求129-135中任一项所述的细胞群，其中所述工程化细胞上所述micb多肽的降低的表面表达被降低至比相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞的所述micb多肽细胞表面表达的水平低约60％或更低的水平，任选地其中不存在可检测的表面表达。
137.如权利要求129-136中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％的细胞不具有所述micb多肽的细胞表面表达。
138.如权利要求129-137中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含编码所述一种或多种致耐受性因子的外源多核苷酸。
139.如权利要求129-138中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含编码cd47的外源多核苷酸。
140.如权利要求129-139中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含降低的所述一种或多种mhci类分子和/或所述一种或多种mhc ii类分子的表达。
141.如权利要求129-140中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含降低的b2m和/或ciita表达。
142.如权利要求129-141中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含降低的b2m和/或ciita表达。
143.如权利要求129-142中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含使b2m基因的两个等位基因均失活的一个或多个改变。
144.如权利要求129-143中任一项所述的细胞群，其中相对于不包含所述修饰的同一细胞类型的未修饰或未改变的细胞，所述群体中至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或99.99％中任一者的细胞包含使ciita基因的两个等位基因均失活的一个或多个改变。
145.一种组合物，所述组合物包含如权利要求129-144中任一项所述的细胞群。
146.一种组合物，所述组合物包含如权利要求129-145中任一项所述的工程化细胞群，其中：
147.一种组合物，所述组合物包含如权利要求129-145中任一项所述的工程化细胞群，其中：
148.一种组合物，所述组合物包含如权利要求129-145中任一项所述的工程化细胞群，其中：
149.一种包含工程化原代β胰岛细胞群的组合物，其中所述工程化原代β胰岛细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因；和(iii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。
150.一种包含工程化原代t细胞群的组合物，其中所述工程化原代t细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因；和(ii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。
151.一种包含工程化原代甲状腺细胞群的组合物，其中所述工程化原代甲状腺细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因(cd47tg)；和(iii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。
152.一种包含工程化原代皮肤细胞群的组合物，其中所述工程化原代皮肤细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因(cd47tg)；和(iii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。
153.一种包含工程化原代内皮细胞群的组合物，其中所述工程化原代内皮细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因(cd47tg)；和(iii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。
154.一种包含工程化原代视网膜色素上皮细胞群的组合物，其中所述工程化原代视网膜色素上皮细胞包含：(i)mica基因的所有等位基因的失活或破坏和/或micb基因的所有等位基因的失活或破坏；(ii)包含编码cd47的外源多核苷酸的转基因(cd47tg)；和(iii)b2m基因的所有等位基因的失活或破坏。<...
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