一种增强碱性磷酸酶化学发光检测灵敏度的级联放大方法技术

本申请涉及诊断试剂的技术领域，具体公开了一种增强碱性磷酸酶化学发光检测灵敏度的级联放大方法。该级联放大方法的反应程序如下：待测样本+磁微粒工作液+标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，孵育，清洗；再加入抗标签抗体偶联的碱性磷酸酶，孵育，清洗，加入碱性磷酸酶底物，进行化学发光。其中，标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体的重链包括：捕获配体‑X1‑碱性磷酸酶‑X2‑蛋白标签；捕获配体为检测靶标的检测抗体。本申请的级联放大方法形成检测靶标‑标签化的碱性磷酸酶偶联的检测配体‑抗标签抗体偶联的碱性磷酸酶，实现了检测靶标与碱性磷酸酶的倍增结合，从而显著提高了检测结果的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及诊断试剂的，更具体地说，涉及一种增强碱性磷酸酶化学发光检测灵敏度的级联放大方法。

技术介绍

1、化学发光是指在一个反应体系中通过化学反应生成一种激发态的产物，在其回到基态的过程中，释放出的能量转变成光子，从而产生发光现象。

2、化学发光免疫分析是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术，具备灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、无污染等优点，因此成为世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是目前临床免疫检测中使用最广泛的一种方法。

3、在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、amppd。其中，异鲁米诺和吖啶酯作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应；鲁米诺和amppd依靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应；amppd在碱性条件下，被碱性磷酸酶解生成相当稳定的amp-d阴离子，有2-30min的分解半衰期，发出波长为470nm的持续性光，其发光的速度取决于碱性磷酸酶的浓度，最终可通过仪器捕获的光信号，推算出待测物质的浓度。p>

4、然而，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体的重链氨基酸序列包括：捕获配体-X1-碱性磷酸酶-X2-蛋白标签；其中，所述捕获配体为检测靶标的检测抗体；所述X1是蛋白连接序列；所述X2是蛋白连接序列。

2.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述捕获配体为全长、（Fab）2或scFv。

3.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述X1为（GGGS）×n、（EEEK）×n或其他氨基酸组成的序列，n为1-8。

4.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶...

【技术特征摘要】

1.一种标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体的重链氨基酸序列包括：捕获配体-x1-碱性磷酸酶-x2-蛋白标签；其中，所述捕获配体为检测靶标的检测抗体；所述x1是蛋白连接序列；所述x2是蛋白连接序列。

2.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述捕获配体为全长、（fab）2或scfv。

3.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述x1为（gggs）×n、（eeek）×n或其他氨基酸组成的序列，n为1-8。

4.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述碱性磷酸酶选自人胎盘碱性磷酸酶、大肠杆菌碱性磷酸酶和牛小肠碱性磷酸酶。

5.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述x2为（gggs）×n、（eeek）×n或其他氨基酸组成的序列，n为1-20。

6.根据权利要求1所述的标签化的碱性磷酸酶偶联的检测抗体，其特征在于，所述蛋白标签包括但不限于flag、his-tag、mbp、gst、ha和strep。...

【专利技术属性】
技术研发人员：周裕军，
申请(专利权)人：北京德奥平生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：