一种诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法技术

一种诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，本发明专利技术的目的是要解决现有成纤维细胞获取的局限性。诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法：一、将PEG8000溶于无菌缓冲液中，消毒处理后向培养后的iPSC上清液中加入贮存液，得到iPSC外泌体；二、当培养第15～25代的诱导性多能干细胞生长到融合85％～90％，更换成分化培养基Ⅰ，得到初步分化的细胞；三、采用分化培养基Ⅱ重悬细胞，在37℃、体积浓度为5％CO<subgt;2</subgt;培养箱中培养；四、当培养至细胞融合至45～55％，更换成分化培养基Ⅲ，继续培养。本发明专利技术通过两步诱导方法将诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞，优化培养条件和培养基成分，可获得足量的成纤维细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种将诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法。

技术介绍

1、诱导性多能干细胞(ipscs)是从24种已知的胚胎干细胞的特异表达的细胞因子中筛选出最关键的4种导入小鼠的成纤维细胞内，已高度分化的体细胞在因子的作用下发生了基因重编程，最终诱导回归多能性的干细胞状态。ipscs在细胞形态、生长特性、干细胞标志物表达等方面与胚胎干细胞非常相似。与胚胎干细胞一样，ipscs能形成密集的集落，并且具有多功能表达基因，表面具有与胚胎干细胞一样的抗原。ipscs还像胚胎干细胞一样具有多向分化潜能，在体内外可以分化为3个胚层来源的所有细胞，进而参与形成机体所有组织和器官。但ipscs不同于胚胎干细胞在于它不涉及伦理道德纠纷。而且如果是从病人自身取材制作消除了潜在的移植免疫排斥反应，在组织工程及再生医学领域有广泛的应用前景。

2、成纤维细胞是皮肤真皮层中最为丰富的细胞类型，其主要功能是分泌细胞外基质的组成原件而用于提供结构的支持。成纤维细胞的应用包括韧带、肌腱的修复，皮肤及创面的修复。成纤维细胞在创伤组织修复过程中起到很大作用，组织修复过程中形成的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于该诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法按照以下步骤实现：

2.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤一所述的完全培养基为92vol％ncEpic Basal Medium+8vol％ncEpic Supplement。

3.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤一中更换完全培养基继续培养时间为48小时。

4.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤b中iPSC上清液和贮存液的体积比为3～5:1...

【技术特征摘要】

1.诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于该诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法按照以下步骤实现：

2.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤一所述的完全培养基为92vol％ncepic basal medium+8vol％ncepic supplement。

3.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤一中更换完全培养基继续培养时间为48小时。

4.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤b中ipsc上清液和贮存液的体积比为3～5:1。

5.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的方法，其特征在于步骤二中成分化培养基ⅰ为dmem high+15vol％fbs+2vol％ipsc外泌体。

6.根据权利要求1所述的诱导性多能干细胞分化为成纤维细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李洋，芦慧颖，张怡，李妍，刘艳青，
申请(专利权)人：武汉天晴干细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：