草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基技术

本发明专利技术涉及菌种深层发酵培养方法及其培养基。本发明专利技术解决现有培养技术中母种繁殖时间长、菌丝质量差、菌球生产时间长、菌球大小不一、生产成本较高等技术缺陷。本发明专利技术用于草菇液体菌种的深层发酵培养。本发明专利技术包括（１）在草菇专用母种培养基内进行母种培养。（２）在草菇原种专用培养基内进行过渡培养，（３）原种经均质化处理后得到均匀的浆质菌种。（４）在摇瓶液体培养基中进行一级摇瓶培养扩增；（５）二级摇瓶培养扩增：（６）在深层发酵液体培养基中进行发酵处理，得到成品草菇液体菌种。本发明专利技术涉及：草菇母种专用培养基、草菇原种专用培养基、摇瓶液体培养基和深层发酵液体培养基。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及菌种深层发酵培养方法及其培养基，特别是草菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基。
技术介绍
：草菇一直使用固体菌种进行生产。在草菇工厂化周年生产中，由于草菇生产周期极短，所以菌种需求量很大，因此固体菌种完全不能适应草菇工厂化周年生产的需要。目前使用的草菇液体菌种发酵培养技术还存在很多问题，具体为：(1)使用通用型培养基进行母种繁殖，因此母种繁殖时间较长，菌丝质量不高；(2)多是将用母种培养基培养的固体菌种不经过均质化处理，直接进行一级摇瓶培养，这样生产菌球的时间长、菌球大小不一，不利于菌球的生长，影响草菇液体菌种的质量。(3)液体菌种所用的培养基含有大量的葡萄糖、蔗糖等成份，使培养环境与栽培环境产生很大的反差，生产的液体菌种在栽培接种后往往产生不吃料的现象，严重影响成品生产。
技术实现思路
：本专利技术克服现有草菇液体菌种发酵培养方法的不足，设计一种既能培养出大小均匀适中的菌种又能缩短培养时间的草菇液体菌种深层发酵培养方法，具体包括：提供一种在草菇液体菌种培养过程中用于母种繁殖的专用母种培养基，该母种培养基能促使菌丝生长旺盛、生长时间短、菌丝强壮，菌丝质量高。提供一种在草菇液体菌种培养过程中使用的以稻草粉和棉籽壳粉为主的草菇原种专用培养基，该培养基既能提供生长旺盛、发育均匀的菌丝片段；又能易于在一级摇瓶培养中进行菌种的均质化处理后形成均匀的浆质菌种。该培养基同时能将原种长期安全的保藏。提供一种在草菇液体菌种培养过程中使用的培养扩增培养基。提供一种在草菇液体菌种发酵培养过程中使用的深层发酵培养基，该培养基能降低成本，利于产生高质量液体草菇菌种。本专利技术的技术方案为：(1)在草菇专用母种培养基内进行母种培养。(2)将在母种培养基内培养长满试管的母种菌丝移种到草菇原种专用培养基内进行过渡培养，培养条件为：温度30±1℃，黑暗培养，待菌丝长满。(3)将专用原种充分打碎后立即移种到摇瓶液体培养基中进行均质化处理后形成均匀的浆质菌种。(4)在摇瓶液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增。(5)将一级摇瓶内生长2-4天的菌液移入盛有新鲜摇瓶液体培养基的二级摇瓶中进行二级摇瓶培养扩增。(6)将二级摇瓶出来的菌液移入盛有液体培养基的血清瓶中进行发酵处理即可得-->到成品草菇液体菌种。上述草菇专用母种培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为：苹果汁(碾碎榨汁)10％-30％琼脂1％-3％草菇菌糠浸出液70％-90％；用氢氧化钠调节pH至6.4-7.4.母种培养基内的培养条件为：温度30±1℃，黑暗培养，待菌丝长满即可。上述草菇专用原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为：稻草粉30％-50％，棉籽壳粉30％-50％；麸皮或米糠4％-16％，石膏1％-4％，含水量50％-70％。草菇专用原种培养基内的培养条件为：温度30±1℃；待菌丝长到试管底时即可。上述草菇专用原种的保藏方法是：将试管用塑料袋包好在20℃恒温保藏，这样草菇专用原种可以保藏4个月左右。可以按生产需要随时用于进行一级摇瓶的培养扩增。上述摇瓶液体培养基为一级和二级摇瓶的培养扩增培养基，其原料部分的成分和重量百   分比含量范围为：黄豆粉1％-4％玉米粉1-4％蔗糖0.5％-2％葡萄糖0.5％-2％酵母膏0.15％-0.6％蛋白胨0.05-0.2％磷酸二氢钾0.05％-0.2％硫酸镁0.025％-0.1％Ph7.8-8。上述一级和二级摇瓶的培养扩增是在三角瓶内进行的。上述一级和二级摇瓶内液体菌种培养扩增的培养条件是：温度：32±1℃；震荡频率：125-155转/分钟；接种量：10％-15％；培养时间：一级和二级摇瓶分别为3-4天和2-3天。上述液体菌种在血清瓶中进行发酵处理的液体培养基为深层发酵培养基，其原料部分的成分和重量百分比含量范围为：豆饼粉1％-5％玉米粉1％-5％蔗糖0.5％-2％葡萄糖0.5％-2％蛋白胨0.15-0.6％豆科类植物油0.25％-0.5％；磷酸二氢钾0.05％-0.2％硫酸镁0.025％-0.1％Ph7.8-8。上述液体菌种在血清瓶中进行发酵处理的培养条件：温度：32-35±1℃通气量1∶0.5(体积比)；通气压力0.5kg/cm2；培养时间：50小时。技术效果：本专利技术的草菇液体菌种的培养方法，在通常的液体菌种发酵培养工艺中增加了均质化处理步骤，即在草菇原种专用培养基中的过渡培养和在摇瓶液体培养基中对原种进行均质化处理，而形成均匀的浆质菌种。该步骤有效的解决了液体菌种发酵培养工艺中接种用菌种均质化处理的技术难题，由于草菇专用原种培养基中的稻草粉和棉籽壳粉本身具有细小的间隙，草菇菌丝在该培养基内培养一段时间后可以在接种时被充分打碎，增加了大量菌丝片段，在摇瓶液体培养基内先形成均匀的浆状菌种，进而培养出大小均匀适中的菌种且缩短培养时间。通过草菇专用原种培养基培养的菌种接种后形成了大量细小的有效菌球，直径在0-2mm之间最具有活力的有效菌球达90％以上。而直接通过母种培养基培养的菌种接种的菌球大小不一，大的菌球由于直径太大，已失去活力。草菇原种专用培养基是一种加入了稻草粉，棉籽壳粉，麸皮或米糠，石膏的培养基，稻草粉，棉籽壳粉，麸皮或米糠的细小间隙有利于蕾丝生长，麸皮或米糠等其他营养成分的加入，可以使蕾丝生长旺盛。草菇原种专用培养基内的原种在20℃恒温保藏条件下可以保藏4个月左右，一次育种后按可以生产需要随时用于进行一级摇瓶的培养扩增。特别适合草菇工厂化周年生产。-->由于草菇专用母种培养基是一种针对草菇液体菌种培养母钟的专用培养基，因此在该培养基中加入了草菇菌糠浸出液。由于在草菇菌糠中含有原来菌丝分解多糖时所用的激素物质和含有被原菌丝分解、但没有被吸收完的多糖营养物质，故加入了草菇菌糠浸出液的专用母种培养基，既缩短了母种培养时间，又使母种菌丝生长特别旺盛，菌丝特别强壮。深层发酵培养基与原有的液体培养基不同点，在于减少了单糖成份(葡萄糖)，菌球生长所需的糖源来自多糖的玉米粉和淀粉，这两种物质的使用，既降低了培养基的成本，也使培养基的碳氮比在更接近自然的环境。提高了栽培接种后草菇的产量。具体实施方式：本实施例为较优实施例，其具体步骤是。(1)在草菇专用母种培养基内进行母种培养。取0.5cm2见方草菇母种，接种至专用母种培养基培养，在30±1℃条件下，黑暗培养，进行菌种活化和继代，形成一支试管母种。本步骤的专用母种培养基配制的含量及成分为：苹果汁(碾碎榨汁)200ml琼脂30g草菇菌糠浸出液800ml；用氢氧化钠调节pH至7.4.(2)将在母种培养基内培养长满试管的母种菌丝移种到草菇原种专用培养基内进行过渡培养：由步骤(1)所得的满瓶菌丝移种到150ml的三角瓶中，可移栽六瓶，然后进行暗培养，温度条件为30±1℃，待菌丝满三角瓶时即可。草菇原种专用培养基配制的含量及成分为：稻草粉45％棉籽壳粉45％麸皮或米糠8％，石膏2％含水量50％-70％。配置方法为：将稻草和棉籽壳粉碎后用40目和60目筛子筛出；将筛出的稻草粉和棉籽壳粉与麸皮或米糠和石膏充分拌匀；将原料与水按比例混合而得，调节PH值为7.4。(3)将培养好的专用原种充分打碎后立即移种到摇瓶液体培养基中进行均质化处理，形成均匀的浆质菌种。将上述六瓶培养好的原种接种到六个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种草菇液体菌种的深层发酵培养方法。其特征在于包括如下步骤：（１）在草菇专用母种培养基内进行母种培养。（２）将在母种培养基内培养的合格的母种菌丝移种到草菇原种专用培养基内进行过渡培养，（３）将专用原种充分打碎后立即移种到摇瓶液体培养基中进行均质化处理后形成均匀的浆质菌种。（４）在摇瓶液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；（５）将一级摇瓶内生长２－４天的菌液移入新鲜摇瓶液体培养基进行二级摇瓶培养扩增：（６）将二级摇瓶培养扩增出的菌液移入盛有深层发酵液体培养基的血清瓶中进行发酵处理即可得到成品草菇液体菌种。

【技术特征摘要】
1.一种草菇液体菌种的深层发酵培养方法。其特征在于包括如下步骤：(1)在草菇专用母种培养基内进行母种培养。(2)将在母种培养基内培养的合格的母种菌丝移种到草菇原种专用培养基内进行过渡培养，(3)将专用原种充分打碎后立即移种到摇瓶液体培养基中进行均质化处理后形成均匀的浆质菌种。(4)在摇瓶液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；(5)将一级摇瓶内生长2-4天的菌液移入新鲜摇瓶液体培养基进行二级摇瓶培养扩增：(6)将二级摇瓶培养扩增出的菌液移入盛有深层发酵液体培养基的血清瓶中进行发酵处理即可得到成品草菇液体菌种。2.根据权利要求1所述的草菇液体菌种的深层发酵培养方法：其特征在于所述草菇液体菌种的深层发酵培养方法各步骤的培养条件为：草菇专用母种培养基内的培养条件为：温度30±1℃，黑暗培养；草菇专用原种培养基的培养条件为：温度30±1℃，黑暗培养。摇瓶液体培养基中进行一级摇瓶和二级摇瓶培养扩增的培养条件为：温度：32±1℃；震荡频率：125-155转/分钟；接种量：10％-15％；培养时间：一级和二级摇瓶分别为3-4天和2-3天；草菇液体菌种在血清瓶中进行发酵处理的培养条件为：温度：32-35±1℃；通气量1∶0.5(体积比)；通气压力：0.5kg/cm2；培养时间：50小时。3.权利要求1-2之一所述的草菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的母种培养基为草菇专用母种培养基，其特征在于草菇专用母种培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为：苹果汁(碾碎榨汁)10％-30％；琼脂1％-3％；草菇菌糠浸出液70％-90％；用氢氧化钠调节pH至6.4-7.4。4.权利要求1-2之一所述的草菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的原...

【专利技术属性】
技术研发人员：张纪明，
申请(专利权)人：张纪明，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]